న్యూరోనల్ గ్లూటామేట్ ట్రాన్స్పోర్టర్ జన్యువు యొక్క ఐసోఫాంలు, slc1a1 / eaac1, గ్లూటామేట్ తీసుకోవడం ప్రతికూలంగా మాడ్యులేట్ చేస్తుంది: అబ్సెసివ్-కంపల్సివ్ డిజార్డర్కు v చిత్యం | అనువాద మనోరోగచికిత్స

న్యూరోనల్ గ్లూటామేట్ ట్రాన్స్పోర్టర్ జన్యువు యొక్క ఐసోఫాంలు, slc1a1 / eaac1, గ్లూటామేట్ తీసుకోవడం ప్రతికూలంగా మాడ్యులేట్ చేస్తుంది: అబ్సెసివ్-కంపల్సివ్ డిజార్డర్కు v చిత్యం | అనువాద మనోరోగచికిత్స

Anonim

విషయము

  • సెల్ సిగ్నలింగ్
  • వ్యాధి జన్యుశాస్త్రం
  • మానసిక రుగ్మతలు

నైరూప్య

న్యూరోనల్ గ్లూటామేట్ ట్రాన్స్పోర్టర్, EAAC1 ను ఎన్కోడ్ చేసే SLC1A1 జన్యువు, జన్యు అధ్యయనాలలో అబ్సెసివ్-కంపల్సివ్ డిజార్డర్ (OCD) లో స్థిరంగా చిక్కుకుంది. అంతేకాకుండా, న్యూరోఇమేజింగ్, బయోకెమికల్ మరియు క్లినికల్ అధ్యయనాలు OCD లో గ్లూటామాటర్జిక్ పనిచేయకపోవటానికి ఒక పాత్రను సమర్థిస్తాయి. SLC1A1 OCD కోసం ఒక అద్భుతమైన అభ్యర్థి జన్యువు అయినప్పటికీ, జన్యు స్థాయిలో దాని నియంత్రణ గురించి చాలా తక్కువగా తెలుసు. ఇక్కడ, మేము మూడు ప్రత్యామ్నాయ SLC1A1 / EAAC1 mRNA ల యొక్క గుర్తింపు మరియు లక్షణాలను నివేదిస్తాము: అంతర్గత ప్రమోటర్ నుండి తీసుకోబడిన ట్రాన్స్క్రిప్ట్, ప్రాధమిక ప్రమోటర్ (P1) ద్వారా ఉత్పత్తి చేయబడిన ట్రాన్స్క్రిప్ట్ నుండి వేరు చేయడానికి P2 అని పిలుస్తారు మరియు ప్రత్యామ్నాయంగా రెండు స్ప్లిడ్ mRNA లు: ex2skip, ఇది ఎక్సాన్ 11 మరియు ఎక్స్‌ 11 స్కిప్ లేదు, ఇది ఎక్సాన్ 11 లేదు. అన్ని ఐసోఫాంలు పూర్తి-నిడివి EAAC1 ట్రాన్స్‌పోర్టర్ నుండి గ్లూటామేట్ తీసుకోవడం నిరోధిస్తాయి. Ex2skip మరియు ex11skip కూడా పాక్షిక కోలోకలైజేషన్‌ను ప్రదర్శిస్తాయి మరియు పూర్తి-నిడివి EAAC1 ప్రోటీన్‌తో సంకర్షణ చెందుతాయి. మూడు ఐసోఫామ్‌లు మానవ మరియు ఎలుకల మధ్య పరిణామాత్మకంగా సంరక్షించబడతాయి మరియు మెదడు, మూత్రపిండాలు మరియు లింఫోసైట్‌లలో నాన్‌పాథలాజికల్ పరిస్థితులలో వ్యక్తీకరించబడతాయి, ఐసోఫాంలు EAAC1 యొక్క శారీరక నియంత్రకాలు అని సూచిస్తున్నాయి. అంతేకాకుండా, నిర్దిష్ట పరిస్థితులలో, అన్ని SLC1A1 ట్రాన్స్‌క్రిప్ట్‌లు నియంత్రణలతో పోలిస్తే OCD ఉన్న విషయాల నుండి తీసుకోబడిన లింఫోసైట్‌లలో విభిన్నంగా వ్యక్తీకరించబడ్డాయి. ఈ ప్రారంభ ఫలితాలు SLC1A1 నియంత్రణ యొక్క సంక్లిష్టతను మరియు OCD మరియు ఇతర మానసిక రుగ్మతలలో గ్లూటామాటర్జిక్ జన్యు వ్యక్తీకరణను ప్రొఫైలింగ్ చేసే సంభావ్య క్లినికల్ యుటిలిటీని వెల్లడిస్తాయి.

పరిచయం

అబ్సెసివ్-కంపల్సివ్ డిజార్డర్ (OCD) లో గ్లూటామాటర్జిక్ పనిచేయకపోవటానికి బహుళ సాక్ష్యాలు సూచించాయి. OCD, 1, 2, 3, 4, 5 ఉన్న వ్యక్తుల మెదడుల్లో గ్లూటామేట్ స్థాయిలు అసాధారణంగా ఉంటాయి మరియు OCD ఉన్న వ్యక్తుల సెరెబ్రోస్పానియల్ ద్రవంలో పెరుగుతాయి. 6, 7 OCD- లాంటి ప్రవర్తనలతో ఎలుకలలోని అధ్యయనాలు కూడా స్ట్రియాటల్ ప్రాంతంలో అసాధారణమైన గ్లూటామాటర్జిక్ న్యూరో సర్క్యూట్రీని సూచిస్తున్నాయి. 8, 9, 10 ఓపెన్ లేబుల్ అధ్యయనాలు మరియు కేస్ రిపోర్టులు గ్లూటామాటర్జిక్ ఏజెంట్లైన రిలుజోల్, 11, 12, 13 మెమంటైన్, 14, 15, 16, 17, 18 మరియు ఎన్ -అసిటైల్సైస్టీన్, 19 వంటివి ఒసిడిలో చికిత్సా ప్రభావాలను కలిగి ఉండవచ్చని సూచిస్తున్నాయి. ముఖ్యముగా , అనేక స్వతంత్ర జన్యు అధ్యయనాలు SLC1A1 జన్యువును స్థిరంగా సూచిస్తాయి , ఇది న్యూరోనల్ గ్లూటామేట్ ట్రాన్స్పోర్టర్, EAAC1 (EAAT3 అని కూడా పిలుస్తారు) ను OCD కొరకు అభ్యర్థి జన్యువుగా సంకేతం చేస్తుంది. 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 ఈ ఫలితాల బలం ఉన్నప్పటికీ, ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ మరియు ప్రత్యామ్నాయ స్ప్లిసింగ్ ద్వారా SLC1A1 జన్యు వ్యక్తీకరణ ఎలా మాడ్యులేట్ చేయబడిందనే దానిపై మనకున్న జ్ఞానం అస్పష్టంగా ఉంది.

ఇక్కడ, బయోఇన్ఫర్మేటిక్స్ విధానాన్ని ఉపయోగించి, మేము మూడు SLC1A1 ప్రత్యామ్నాయ ఐసోఫామ్‌లను గుర్తించాము మరియు వర్గీకరించాము: అంతర్గత ప్రమోటర్ (P2) నుండి పొందిన ట్రాన్స్క్రిప్ట్ మరియు రెండు ప్రత్యామ్నాయంగా స్ప్లిస్డ్ ట్రాన్స్క్రిప్ట్స్, ex2skip (తప్పిపోయిన ఎక్సాన్ 2) మరియు ex11skip (తప్పిపోయిన ఎక్సోన్ 11). ఈ ఐసోఫాంలు SLC1A1 / EAAC1 ఫంక్షన్ యొక్క ప్రతికూల మాడ్యులేటర్లుగా పనిచేస్తాయి మరియు EAAC1 ట్రాన్స్పోర్టర్ ద్వారా గ్లూటామేట్ రవాణాను నిరోధిస్తాయి. ఇంకా, నాడీ జన్యు లిప్యంతరీకరణను విశ్లేషించడానికి పరిధీయ లింఫోసైట్ వ్యవస్థలోని నియంత్రణలతో పోలిస్తే అన్ని SLC1A1 ట్రాన్స్‌క్రిప్ట్‌లు OCD లో విభిన్నంగా నియంత్రించబడ్డాయి. OCD మరియు ఇతర మానసిక రుగ్మతలలో గ్లూటామేట్ జీవశాస్త్రాన్ని అర్థం చేసుకోవడానికి ఈ పరిశోధనలకు has చిత్యం ఉంది.

సామాగ్రి మరియు పద్ధతులు

అణు జీవశాస్త్రం

బయోఇన్ఫర్మేటిక్స్

మానవ మరియు మౌస్ EAAC1 జన్యు శ్రేణులను (//www.ncbi.nlm.nih.gov/) మరియు ఎక్సోన్ సంస్థ (కాలిఫోర్నియా విశ్వవిద్యాలయం శాంటా క్రజ్ జన్యు బ్రౌజర్‌ను ఉపయోగించి //genome.ucsc.edu/ వద్ద) ఇంటర్నెట్ వనరులను ఉపయోగించారు. ప్రమోటర్ 2.0 (//www.cbs.dtu.dk/services/Promoter/) మరియు CpGPlot (//www.ebi.ac.uk/Tools/emboss/cpgplot/index) ప్రోగ్రామ్‌లను ఉపయోగించి సంభావ్య ప్రమోటర్ల కోసం సంబంధిత జన్యు శ్రేణులను స్కాన్ చేశారు. html) CpG ద్వీపాలను గుర్తించడానికి. EAAC1 కు సమానమైన మానవ మరియు మౌస్ వ్యక్తీకరించిన సీక్వెన్స్ ట్యాగ్‌లు జెన్‌బ్యాంక్ నుండి లేదా నేరుగా UCSC జన్యు బ్రౌజర్ సైట్ నుండి డౌన్‌లోడ్ చేయబడ్డాయి. మునుపటి రెండు ప్రచురణలు SLC1A1 / EAAC1 లోకస్ నుండి పొందిన ప్రత్యామ్నాయ లిప్యంతరీకరణల ఉనికిని కూడా సూచిస్తున్నాయి. 29, 30

SLC1A1 / EAAC1 ప్రత్యామ్నాయ ట్రాన్స్క్రిప్ట్స్ యొక్క క్లోనింగ్

HEK-293 సెల్ RNA నుండి పొందిన పరిపూరకరమైన DNA నుండి PCR ద్వారా సంబంధిత సన్నివేశాలు విస్తరించబడ్డాయి. ప్రతి EAAC1 ఐసోఫార్మ్‌ను వెక్టర్ pcDNA3.1 (ఇన్విట్రోజెన్ లైఫ్ టెక్నాలజీస్, గ్రాండ్ ఐలాండ్, NY, USA) లో కలపడానికి ప్రామాణిక పున omb సంయోగం DNA టెక్నాలజీ 31 ఉపయోగించబడింది మరియు కార్బాక్సిల్ టెర్మినల్ FLAG లేదా హేమాగ్గ్లుటినిన్ (HA) ట్యాగ్ (HA- ట్యాగ్) తో ఇంజనీరింగ్ చేయబడింది. అన్ని సమావేశమైన DNA లు క్రమం ద్వారా నిర్ధారించబడ్డాయి.

పరిమాణాత్మక PCR (qPCR)

ట్రిజోల్ రియాజెంట్ (ఇన్విట్రోజెన్ లైఫ్ టెక్నాలజీస్) ను ఉపయోగించి కణజాలాల నుండి ఆర్‌ఎన్‌ఎ సేకరించబడింది మరియు యాదృచ్ఛిక ప్రైమర్‌ల సమక్షంలో పరిపూరకరమైన డిఎన్‌ఎ ఉత్పత్తి చేయబడింది. qPCR ను ప్లాటినం సిబర్‌గ్రీన్ qPCR సూపర్‌మిక్స్-యుడిజిని ROX (ఇన్విట్రోజెన్ లైఫ్ టెక్నాలజీస్) తో 0.4 μ M ప్రైమర్‌ల (సప్లిమెంటరీ టేబుల్ 1) సమక్షంలో నిర్వహించారు. ABI HT7900 ఫాస్ట్ సీక్వెన్స్ డిటెక్షన్ సిస్టమ్ (అప్లైడ్ బయోసిస్టమ్స్, గ్రాండ్ ఐలాండ్, NY, USA) ఉపయోగించి డేటా సేకరించబడింది. ఇంతకుముందు వివరించిన విధంగా డేటా విశ్లేషించబడింది, [ 33] విస్తరణ సామర్థ్యాన్ని పరిగణనలోకి తీసుకొని 34 మరియు గృహనిర్వాహక నియంత్రణకు సాధారణీకరణ (మానవ EAAC1 కోసం β2- మైక్రోగ్లోబులిన్ మరియు మౌస్ EAAC1 కోసం β- ఆక్టిన్).

జీవ పదార్థాలు

మానవ మెదడు నమూనాలు

హ్యూమన్ ఫ్రంటల్ లోబ్ మరియు స్ట్రియాటం నుండి ఘనీభవించిన విభాగాలు స్టాన్లీ ఫౌండేషన్ న్యూరోపాథాలజీ కన్సార్టియం నుండి పొందబడ్డాయి.

మౌస్ మెదడు మరియు న్యూరాన్లు

వయోజన C57 / BL6 ఎలుకల (జాక్సన్ లాబొరేటరీ, బార్ హార్బర్, ME, USA) నుండి మెదడులను పొందారు. నియోనాటల్ C57 / BL6 కార్టెక్స్ నుండి న్యూరోనల్ సంస్కృతులు గతంలో ప్రచురించిన పద్ధతులను ఉపయోగించి తయారు చేయబడ్డాయి. ప్రయోగాత్మక ప్రోటోకాల్‌లను బ్రౌన్ విశ్వవిద్యాలయంలోని ఇనిస్టిట్యూషనల్ యానిమల్ కేర్ అండ్ యూజ్ కమిటీ ఆమోదించింది.

మానవ లింఫోసైట్లు

OCD సమూహానికి వయోజన విషయాలు: (ఎ) 18 మరియు 65 సంవత్సరాల మధ్య వయస్సు గలవారు, (బి) OCD కొరకు DSM-IV ప్రమాణాలకు అనుగుణంగా ఉన్నారు, (సి) యేల్-బ్రౌన్ అబ్సెసివ్-కంపల్సివ్ స్కేల్ స్కోర్లు> 16. నియంత్రణ విషయాలు: (ఎ) 18 మరియు 65 సంవత్సరాల మధ్య వయస్సు గలవారు, (బి) OCD కొరకు DSM-IV ప్రమాణాలకు అనుగుణంగా లేదు. గత 6 నెలల్లో (ఎ) మద్యం లేదా మాదకద్రవ్యాల దుర్వినియోగం / ఆధారపడటం (నికోటిన్ మినహా) కోసం ప్రస్తుత డిఎస్ఎమ్- IV ప్రమాణాలను, (బి) అనోరెక్సియా లేదా బులిమియా నెర్వోసా కోసం ప్రస్తుత డిఎస్ఎమ్- IV ప్రమాణాలకు అనుగుణంగా ఉంటే పాల్గొనేవారు మినహాయించబడ్డారు, (సి) కలుసుకున్నారు మానసిక రుగ్మత లేదా బైపోలార్ డిజార్డర్ కొరకు జీవితకాల DSM-IV ప్రమాణాలు, (డి) ప్రస్తుతం ఆత్మహత్య లేదా నరహత్య, (ఇ) సేంద్రీయ బలహీనతను గుర్తించాయి.

అమెరికాలోని రోడ్ ఐలాండ్‌లోని ప్రొవిడెన్స్‌లోని ఒక ప్రైవేట్ మానసిక ఆసుపత్రి బట్లర్ హాస్పిటల్‌లోని ఓసిడి రీసెర్చ్ సెంటర్ నుండి క్లినిషియన్ రిఫరల్స్ ద్వారా సెప్టెంబర్ 2009 నుండి అక్టోబర్ 2010 వరకు పాల్గొనేవారిని నియమించారు. ఈ పైలట్ అధ్యయనం నిర్వహించడానికి ఆసుపత్రి సంస్థాగత సమీక్ష బోర్డు నుండి అనుమతి పొందబడింది. OCD సమూహంలో ఎనిమిది మంది మహిళలు మరియు ఆరుగురు పురుషులు ఉన్నారు మరియు నియంత్రణ సమూహంలో నలుగురు ఆడవారు మరియు ఐదుగురు పురుషులు ఉన్నారు. Groups 2 (3, N = 23) = 0.56, పి = 0.59 అనే రెండు సమూహాల మధ్య లింగంలో గణనీయమైన తేడా లేదు. OCD సమూహం యొక్క సగటు వయస్సు ( M ocd = 40.00, sd = 14.16) నియంత్రణల నుండి గణనీయంగా తేడా లేదు ( M c = 37.17, sd = 13.93; t (21) = 0.49, P = .63). నియంత్రణ సమూహంతో ( M c = 44.20, sd = 14.06; t (9) = 1.51, P = 0.17) పోలిస్తే OCD సమూహంలో ( M ocd = 32.17, sd = 12.38) మగవారి వయస్సులో గణనీయమైన తేడా లేదు. . అయినప్పటికీ, OCD సమూహంలోని ఆడవారి సగటు వయస్సు ( M ocd = 45.88, sd = 12.32) నియంత్రణ సమూహంలోని ఆడవారి సగటు వయస్సు కంటే గణనీయంగా పాతది ( M c = 28.25, sd = 8.10; t (10) = 2.56, పి = 0.02). దీని ప్రకారం, అన్ని గణాంక విశ్లేషణలు లింగం ద్వారా వేరు చేయబడలేదు.

OCD తో ఉన్న అన్ని సబ్జెక్టులు (ఒక అన్‌మెడికేటెడ్ సబ్జెక్ట్ మినహా) సెలెక్టివ్ సిరోటోనిన్ రీ-టేక్ ఇన్హిబిటర్‌తో చికిత్స చేయబడ్డాయి మరియు కొన్నింటిలో అదనపు యాంటిడిప్రెసెంట్స్ లేదా సహాయక మందులు ఉన్నాయి. OCD సబ్జెక్టులు ఏవీ యాంటిసైకోటిక్స్ మీద లేవు. నియంత్రణలలో ఏదీ OCD చరిత్రను కలిగి లేదు మరియు ఏదీ సైకోట్రోపిక్స్‌తో చికిత్స పొందలేదు.

తయారీదారు యొక్క స్పెసిఫికేషన్ల ప్రకారం ఫికాల్-హైపాక్ ప్రవణత (జిఇ హెల్త్‌కేర్ బయోసైన్సెస్, పిస్కాటవే, టౌన్‌షిప్, ఎన్‌జె, యుఎస్‌ఎ) ఉపయోగించి లింఫోసైట్లు శుద్ధి చేయబడ్డాయి మరియు RPMI మీడియాలో 10% పిండం దూడ సీరం, 100 U ml −1 పెన్సిలిన్ మరియు 100 μg ml 5% CO 2 -హ్యూమిడిఫైడ్ ఇంక్యుబేటర్‌లో −1 స్ట్రెప్టోమైసిన్.

కారకాల

డోపామైన్, ఫ్లూక్సేటైన్ మరియు ట్రాన్స్ -రెటినోయిక్ ఆమ్లం సిగ్మా-ఆల్డ్రిచ్ (సెయింట్ లూయిస్, MO, USA) నుండి కొనుగోలు చేయబడ్డాయి.

సెల్ బయాలజీ

సెల్ పంక్తులు

10% పిండం దూడ సీరం, 2 m ML -glutamine, 100 U ml -1 పెన్సిలిన్ మరియు 100 μg ml - తో దుల్బెకో యొక్క సవరించిన ఈగిల్ మాధ్యమంలో 5% CO 2 -హమిడిఫైడ్ ఇంక్యుబేటర్‌లో HEK-293 మరియు హెలా కణాలు 37 ° C వద్ద నిర్వహించబడ్డాయి. 1 స్ట్రెప్టోమైసిన్. దుల్బెకో యొక్క సవరించిన ఈగిల్ మాధ్యమంలో కరిగించిన డిఎన్‌ఎను ఉపయోగించి తయారీదారు వివరించిన స్పెసిఫికేషన్లను ఉపయోగించి అన్ని బదిలీలు ఫ్యూజీన్ హెచ్‌డి (ప్రోమెగా కార్పొరేషన్, మాడిసన్, డబ్ల్యూఐ, యుఎస్‌ఎ) తో జరిగాయి.

గ్లూటామేట్ తీసుకోవడం

ఐసోప్లేట్ 96-బాగా టిసి ప్లేట్లపై (పెర్కిన్ ఎల్మెర్ లైఫ్ సైన్స్ రీసెర్చ్, వాల్తామ్, ఎంఏ, యుఎస్ఎ) HEK-293 కణాలు 1 mg ml −1 పాలీ- D-లైసిన్ (> 37 ° C వద్ద 3 గం) తో ముందే చికిత్స చేయబడ్డాయి. కణాలు సుమారు 50% సంగమం చేసినప్పుడు, ఒక బావికి 60 ng DNA బదిలీ చేయబడింది. రెండు రోజుల పోస్ట్ బదిలీ, సంస్కృతి మాధ్యమం తొలగించబడింది మరియు కణాలు 10 μ M [ 3 H] -గ్లూటామేట్ (పెర్కిన్ ఎల్మెర్ - న్యూ ఇంగ్లాండ్ న్యూక్లియర్, వాల్థం, MA, USA) లో ఫాస్ఫేట్-బఫర్డ్ సెలైన్ (పిబిఎస్) లో 2.2 మీ. CaCl 2 (PBS-Ca). నియమించబడిన సమయాల్లో, గ్లూటామేట్ తొలగించబడింది, కణాలు PBS-Ca తో రెండుసార్లు కడిగి, 0.2 M NaOH లో లైస్ చేయబడ్డాయి. ప్రతి బావికి 150 μl ఆప్టిఫ్లోర్ వాల్యూమ్ జోడించబడింది మరియు వాలక్ మైక్రోబెటా ప్లేట్ కౌంటర్ (పెర్కిన్ ఎల్మెర్) తో లెక్కించబడుతుంది.

కాన్ఫోకల్ మైక్రోస్కోపీ

పాలీ-డి -లైసిన్-చికిత్స చేసిన గ్లాస్ కవర్‌లిప్‌లపై హెలా కణాలు పెరిగాయి మరియు వివిధ EAAC1 నిర్మాణాలతో బదిలీ చేయబడ్డాయి. రెండు రోజుల పోస్ట్ ట్రాన్స్ఫెక్షన్, కణాలు పిబిఎస్‌లో 4% పారాఫార్మల్డిహైడ్‌లో పరిష్కరించబడ్డాయి, 0.3% ట్రిటాన్ ఎక్స్ -100 తో లైస్ చేయబడ్డాయి మరియు ట్రిస్-బఫర్డ్ సెలైన్‌లో 10% గాడిద సీరంలో 0.05% మధ్య 20 (టిబిఎస్‌టి) తో రాత్రిపూట 4. సి వద్ద నిరోధించబడ్డాయి. FLAG- ట్యాగ్ (M2 మోనోక్లోనల్ యాంటీబాడీ, ఎజిలెంట్, శాంటా క్లారా, CA, USA) లేదా HA- ట్యాగ్ (శాంటా క్రజ్ బయోటెక్నాలజీ, శాంటా క్రజ్, CA, USA, HA-) కు వ్యతిరేకంగా నిర్దేశించిన ప్రతిరోధకాలతో (TBST లో కరిగించబడుతుంది) స్థిర కణాలు రాత్రిపూట పొదిగేవి. ప్రోబ్ రాబిట్ యాంటీబాడీ Y-11). కవర్‌లిప్‌లను టిబిఎస్‌టితో కడిగి, అలెక్సా 647-కంజుగేటెడ్ యాంటీ-మౌస్ యాంటీబాడీ మరియు అలెక్సా 555-కంజుగేటెడ్ యాంటీ రాబిట్ యాంటీబాడీ (ఇన్విట్రోజెన్ లైఫ్ టెక్నాలజీస్) తో పొదిగే ద్వారా వెల్లడైన ప్రాథమిక ప్రతిరోధకాలు. జీస్ ఎల్ఎస్ఎమ్ 510 కన్ఫోకల్ మైక్రోస్కోప్ (జీస్, థోర్న్వుడ్, ఎన్వై, యుఎస్ఎ) ఉపయోగించి కణాలు దృశ్యమానం చేయబడ్డాయి. చిత్రాలను ఇమేజ్‌జే మరియు కోలోకలైజేషన్ విశ్లేషణల కోసం ప్లగ్-ఇన్ ఉపయోగించి విశ్లేషించారు. 36

పుల్డౌన్ పరీక్షలు

HA- ట్యాగ్ చేయబడిన P1 మరియు FLAG- ట్యాగ్ చేయబడిన P1 లేదా FLAG- ట్యాగ్ చేయబడిన ఐసోఫామ్‌లను కలిగి ఉన్న EAAC1 DNA నిర్మాణాల కలయికతో హెలా కణాలు బదిలీ చేయబడ్డాయి. రెండు రోజుల పోస్ట్ ట్రాన్స్ఫెక్షన్, కణాలు పండించబడ్డాయి, క్షీరద ప్రోటీన్ వెలికితీత కారకంలో ఉంచబడ్డాయి (పియర్స్ కెమికల్ కంపెనీ, రాక్ఫోర్డ్, IL, USA). ఫ్లాగ్-ట్యాగ్ చేయబడిన ప్రోటీన్లు M2 యాంటీబాడీ అఫినిటీ జెల్ (కోడాక్ సైంటిఫిక్ ఇమేజింగ్ సిస్టమ్స్, రోచెస్టర్, NY, USA) ను ఉపయోగించి లైసేట్ల నుండి వేరుచేయబడ్డాయి మరియు HA- ట్యాగ్‌కు వ్యతిరేకంగా యాంటీబాడీకి ఇమ్యునోబ్లోట్ చేయబడ్డాయి. ఒడిస్సీ ఇన్‌ఫ్రారెడ్ ఇమేజింగ్ సిస్టమ్ (LI-COR బయోసైన్సెస్, లింకన్, NE, USA) ఉపయోగించి ఇమ్యునోబ్లోట్‌లను దృశ్యమానం చేశారు.

ఫలితాలు

SLC1A1 జన్యువులోని రెండవ ప్రమోటర్ (P2) యొక్క గుర్తింపు

SLC1A1 జన్యువు ఒకటి కంటే ఎక్కువ ప్రమోటర్ల నియంత్రణకు లోబడి ఉందో లేదో తెలుసుకోవడానికి , మేము బహిరంగంగా లభించే DNA సన్నివేశాలను (మూర్తి 1) ఉపయోగించి మానవ మరియు ఎలుక జన్యువులను విశ్లేషించాము. మానవ మరియు మౌస్ SLC1A1 జన్యువు యొక్క నిర్మాణాలు చాలా పోలి ఉంటాయి: రెండూ 12 ఎక్సోన్లచే ఎన్కోడ్ చేయబడ్డాయి, ప్రతి ఎక్సోన్ యొక్క సరిహద్దులు వాస్తవంగా ఒకేలా ఉంటాయి మరియు జన్యువు వెంట ఎక్సోన్ల పంపిణీ చాలా పోలి ఉంటుంది (గణాంకాలు 1 ఎ మరియు బి). ప్రమోటర్ ప్రిడిక్షన్ ప్రోగ్రామ్‌లు (ప్రమోటర్ 2.0 మరియు సిపిజిప్లాట్) ఎక్సాన్ 1 లో ఒకే సిపిజి ద్వీపాన్ని వెల్లడించింది, ఇది ఎస్‌ఎల్‌సి 1 ఎ 1 యొక్క ప్రాధమిక ప్రమోటర్‌ను సూచిస్తుంది మరియు మానవులలో మరియు ఎక్సోన్ 5 యొక్క అప్‌స్ట్రీమ్ ఎలుకలలో ఒక నవల సంభావ్య అంతర్గత ప్రమోటర్ (గణాంకాలు 1 ఎ మరియు బి). ఈ సైట్ నుండి ట్రాన్స్క్రిప్షన్ ఎక్సాన్ 5 (ఎక్స్ అని పిలువబడే) యొక్క అదనపు ఎక్సాన్ అప్‌స్ట్రీమ్‌ను కలిగి ఉంటుంది, ఈ ట్రాన్స్‌క్రిప్ట్‌ను ప్రత్యేకంగా గుర్తించడానికి ప్రైమర్‌ల రూపకల్పనను సులభతరం చేస్తుంది (మూర్తి 1 సి). మౌస్ SLC1A1 జన్యువులో రెండవ ప్రమోటర్ ఉనికిని గతంలో నివేదించారు, [ 29] అయితే, ఇక్కడ వివరించబడిన అంతర్గత మానవ ప్రమోటర్ ఇంతకు ముందు నివేదించబడలేదు.

Image

మానవ మరియు మౌస్ SLC1A1 / EAAC1 జన్యువుల సంస్థ. ( , బి ) పైభాగంలో సూచించిన బేస్ జత సంఖ్యతో జన్యువుల సరళ ప్రాతినిధ్యం. మానవ SLC1A1 / EAAC1 జన్యువు క్రోమోజోమ్ 9 వెంట అమర్చబడిన 12 ఎక్సోన్‌లను కలిగి ఉంటుంది. రెండు ఫంక్షనల్ ప్రమోటర్లు (నియమించబడిన P1 మరియు P2) ఉన్నాయి. మౌస్ SLC1A1 / EAAC1 జన్యువు (క్రోమోజోమ్ 19 న) మానవ జన్యువుతో సమానంగా ఉంటుంది; దాని 12 ఎక్సోన్లలో 11 మానవులలో మాదిరిగానే ఉంటాయి. మౌస్ EAAC1 జన్యువు రెండు ఫంక్షనల్ ప్రమోటర్లను కలిగి ఉంది, నియమించబడిన P1 మరియు P2. మౌస్ EAAC1 mRNA మొత్తం 85% మానవ శ్రేణికి సమానంగా ఉంటుంది మరియు మౌస్ ప్రోటీన్ 90% మానవుడితో సమానంగా ఉంటుంది. ( సి ) ప్రమోటర్లు P1 మరియు P2 నుండి పొందిన mRNA ట్రాన్స్క్రిప్ట్స్ యొక్క ఎక్సాన్ నిర్మాణం అంచనా. ( డి ) EAAC1 యొక్క ప్రోటీన్‌కు ఎక్సోన్ల సహకారం. సెల్ లోపలి మరియు వెలుపల సూచించిన సెల్యులార్ పొరలో EAAC1 ప్రోటీన్ యొక్క ఒకే సబ్యూనిట్ యొక్క స్కీమాటిక్ రేఖాచిత్రం. రేఖాచిత్రం పైరోకాకస్ హోరికోషి యొక్క గ్లూటామేట్ హోమోలాగ్‌కు EAAC1 యొక్క అమరికపై ఆధారపడి ఉంటుంది , దీని నిర్మాణం స్ఫటికాకార శాస్త్రం ద్వారా నిర్ణయించబడుతుంది. 39 సంఖ్య మరియు రంగు నిర్దిష్ట ఎక్సోన్లచే ఎన్కోడ్ చేయబడిన ప్రోటీన్ యొక్క ప్రాంతాన్ని సూచిస్తాయి.

పూర్తి పరిమాణ చిత్రం

Internal హించిన రెండవ అంతర్గత ప్రమోటర్ క్రియాత్మకంగా ఉందో లేదో తెలుసుకోవడానికి, మేము మానవ HEK-293 కణాలను ఉపయోగించాము, ఇది మానవ పిండ మూత్రపిండాల నుండి తీసుకోబడిన సెల్ లైన్, ఇది తక్కువ స్థాయి EAAC1 ను వ్యక్తపరుస్తుంది. వాస్తవానికి, రెండవ ప్రమోటర్ ప్రాధమిక ప్రమోటర్ (సప్లిమెంటరీ మూర్తి 1) నుండి పొందిన ట్రాన్స్క్రిప్ట్ యొక్క వ్యక్తీకరణను నడిపించగలదని PCR ధృవీకరించింది. ప్రాధమిక ప్రమోటర్, పి 1 (గణాంకాలు 1 ఎ మరియు బి) నుండి వేరు చేయడానికి మేము అంతర్గత ప్రమోటర్ పి 2 అని పిలిచాము.

రెండు ప్రత్యామ్నాయంగా విభజించబడిన SLC1A1 / EAAC1 mRNA ల గుర్తింపు

మేము మానవ మరియు ఎలుకలలో ప్రత్యామ్నాయంగా విభజించబడిన SLC1A1 / EAAC1 mRNA ల కోసం శోధించాము. మునుపటి నివేదికలో, ఎక్సాన్ 2 లేని 30 కత్తిరించబడిన మానవ EAAC1 mRNA నివేదించబడింది, కాని సంబంధిత మౌస్ mRNA కనుగొనబడలేదు మరియు ఫంక్షనల్ క్యారెక్టరైజేషన్ నిర్వహించబడలేదు. ఈ mRNA HEK-293 కణాలలో వ్యక్తీకరించబడిందని ధృవీకరించడానికి PCR ఉపయోగించబడింది (అనుబంధ మూర్తి 1). మేము ఈ mRNA ex2skip (మూర్తి 1) అని పిలిచాము.

అదనంగా, మేము బహిరంగంగా అందుబాటులో ఉన్న డేటాను (//www.ncbi.nlm.nih.gov) ఉపయోగించి మానవ మరియు మౌస్ వ్యక్తీకరించిన సీక్వెన్స్ ట్యాగ్‌లను పరిశీలించాము. మానవులలో, ఒక వ్యక్తీకరించిన సీక్వెన్స్ ట్యాగ్ గుర్తించబడింది, దీనిలో ఎక్సాన్ 11 తొలగించబడింది. సంభావ్య ట్రాన్స్క్రిప్ట్ను ex11skip అని పిలుస్తారు మరియు ఇంతకు ముందు వివరించబడలేదు. ఈ mRNA యొక్క వ్యక్తీకరణ PCR (అనుబంధ మూర్తి 1) ఉపయోగించి HEK-293 కణాలలో ధృవీకరించబడింది. ఎలుకలలో, అదనపు లిప్యంతరీకరణలు గుర్తించబడలేదు.

HEK-293 కణాలలో ప్రత్యామ్నాయ mRNA లు కూడా EAAC1 mRNA యొక్క మొత్తం పొడవును విస్తరించి ఉన్న PCR ను ఉపయోగించి పరీక్షించబడ్డాయి, కాని ఇతర mRNA లు కనుగొనబడలేదు.

మానవ మరియు ఎలుకలలో ప్రత్యామ్నాయ SLC1A1 / EAAC1 mRNA ట్రాన్స్క్రిప్ట్స్ సమృద్ధి

వివిధ రకాల మానవ మరియు మౌస్ పోస్ట్‌మార్టం మెదడు కణజాలాలలో P2, ex2skip మరియు ex11skip mRNA ల యొక్క సాపేక్ష సమృద్ధిని లెక్కించడానికి qPCR ఉపయోగించబడింది. మేము ఎక్సాన్ 5 (ఎక్సాన్ ఎక్స్) యొక్క అదనపు ఎక్సాన్ సీక్వెన్స్, అలాగే ఈ ట్రాన్స్క్రిప్ట్స్ యొక్క నిర్దిష్ట విస్తరణ కోసం ప్రైమర్‌లను రూపొందించడానికి ప్రత్యామ్నాయంగా స్ప్లైస్డ్ ట్రాన్స్‌క్రిప్ట్స్‌లోని ప్రత్యేకమైన ఎక్సాన్-ఎక్సాన్ జంక్షన్లను ఉపయోగించాము.

పి 2 ట్రాన్స్క్రిప్షన్కు అనుగుణమైన ఎమ్ఆర్ఎన్ఎ యొక్క గణనీయమైన స్థాయిలను అలాగే మానవులు మరియు ఎలుకలలో పి 1 ప్రాధమిక ట్రాన్స్క్రిప్ట్కు సంబంధించి ఎక్స్ 2 స్కిప్ మరియు ఎక్స్ 11 స్కిప్లను మేము గమనించాము (మూర్తి 2). మానవులలో, ప్రత్యామ్నాయంగా స్ప్లిస్డ్ ఎక్స్‌2 స్కిప్ మరియు ఎక్స్‌ 11 స్కిప్ ఎమ్‌ఆర్‌ఎన్‌ఏలు ముఖ్యంగా స్ట్రియాటమ్‌లో పుష్కలంగా ఉండేవి, ఇక్కడ ఒసిడిలో అసాధారణతలు సంభవిస్తాయని భావిస్తున్నారు. మానవ మరియు ఎలుక కణజాలాలలో, ప్రత్యామ్నాయంగా స్ప్లైస్డ్ mRNA లతో పోలిస్తే P2 ప్రమోటర్ నుండి ట్రాన్స్క్రిప్షన్ తక్కువ స్థాయిలో కనుగొనబడింది. అందువల్ల, ప్రత్యామ్నాయ EAAC1 లిప్యంతరీకరణలు అన్ని రకాల కణజాలాలలో వ్యక్తీకరించబడతాయి, మానవులలో మరియు ఎలుకలలో ఇలాంటి సాపేక్ష సమృద్ధి ఉంటుంది.

Image

మానవ మరియు ఎలుక కణజాలాలలో ప్రత్యామ్నాయ SLC1A1 / EAAC1 ట్రాన్స్క్రిప్ట్స్ యొక్క సాపేక్ష సమృద్ధి. సూచించిన వివిధ కణజాలాల నుండి సేకరించిన RNA పరిమాణాత్మక PCR కి లోబడి ఉంది (పదార్థాలు మరియు పద్ధతులను చూడండి) మరియు ఇంటిపని నియంత్రణకు సాధారణీకరించబడింది (మానవులకు β2- మైక్రోగ్లోబులిన్, ఎలుకకు β- ఆక్టిన్). ఫలితాలు లాగరిథమిక్ స్కేల్ (HE సెమ్ సూచించిన చోట, HEK-293 కణాలు ( n 12) లేదా మానవ లింఫోసైట్లు ( n -8%) పై వర్ణించబడ్డాయి.

పూర్తి పరిమాణ చిత్రం

SLC1A1 / EAAC1 ఐసోఫాంలు EAAC1- మధ్యవర్తిత్వ గ్లూటామేట్ రవాణాను నిరోధిస్తాయి

P2 ప్రమోటర్ నుండి పొందిన ట్రాన్స్క్రిప్ట్ మరియు రెండు ప్రత్యామ్నాయంగా విభజించబడిన P1 mRNA లు మానవులలో మరియు ఎలుకలలో కనిపిస్తాయి, అవి పరిణామాత్మకంగా పరిరక్షించబడ్డాయి మరియు జీవశాస్త్రపరంగా ముఖ్యమైనవి అని సూచిస్తున్నాయి. అనువదించినప్పుడు, ఈ ప్రత్యామ్నాయ mRNA లు ప్రత్యేకమైన ప్రోటీన్లకు దారి తీస్తాయని are హించబడ్డాయి, అయితే P2 నుండి ట్రాన్స్క్రిప్ట్ ఎక్సోన్స్ 5–12 (మూర్తి 1 డి) చేత ఎన్కోడ్ చేయబడిన ప్రోటీన్‌కు దారితీస్తుందని is హించబడింది. Ex2skip లో ఎక్సాన్ 2 లేకపోవడం 47 అమైనో ఆమ్లాల యొక్క ఫ్రేమ్ తొలగింపును ఉత్పత్తి చేస్తుంది, ఇది పూర్తి-నిడివి గల ప్రోటీన్ (మూర్తి 1d) లోని ట్రాన్స్‌మెంబ్రేన్ హెలిక్స్‌లో ఒకదాన్ని తొలగిస్తుందని is హించబడింది. అదేవిధంగా, ex11skip లో ఎక్సాన్ 11 లేకపోవడం కార్బాక్సిల్ చివరలో 47 అమైనో ఆమ్లాల యొక్క మరొక ఫ్రేమ్ తొలగింపును ఉత్పత్తి చేస్తుంది (మూర్తి 1 డి).

ఈ ప్రోటీన్ ఐసోఫామ్‌ల యొక్క జీవ పనితీరును అంచనా వేయడానికి, ప్రోటీన్ స్థానికీకరణ మరియు క్రియాత్మక విశ్లేషణలను ప్రారంభించడానికి మేము ప్రతి ప్రత్యామ్నాయ ట్రాన్స్‌క్రిప్ట్‌ను కార్బాక్సిల్-టెర్మినల్ FLAG లేదా HA ట్యాగ్ కలిగి ఉన్న వెక్టర్‌లోకి క్లోన్ చేసాము. మేము మొదట HEK-293 కణాలలో గ్లూటామేట్ తీసుకోవడం పరిశీలించాము, ఇది ఎండోజెనస్ EAAC1 ను వ్యక్తీకరించే సెల్ లైన్ మరియు దాదాపు 100% సామర్థ్యంతో బదిలీ చేయవచ్చు.

ప్రాధమిక EAAC1 ట్రాన్స్క్రిప్ట్, P1, మరియు గుర్తించబడిన అన్ని ప్రత్యామ్నాయ ఐసోఫాంలు HEK-293 కణాలలో వ్యక్తీకరించబడ్డాయి, ఇవి గ్లూటామేట్ తీసుకోవడంపై వారి చర్యను నిర్ణయించాయి (మూర్తి 3a). గ్లూటామేట్ రవాణా విలక్షణ సంతృప్త గతిశాస్త్రానికి అనుగుణంగా ఉంటుంది మరియు 3 [H] -గ్లూటామేట్ (అనుబంధ మూర్తి 2) తో కార్యకలాపాలను పర్యవేక్షించిన తర్వాత 60 నిమిషాల పాటు పీఠభూమి చేస్తుంది. ప్రతి EAAC1 ఐసోఫార్మ్ (మూర్తి 3a) ను వ్యక్తీకరించడానికి ఉపయోగించే వెక్టర్, పి 1 యొక్క వ్యక్తీకరణ నాన్ట్రాన్స్‌ఫెక్టెడ్ కణాలతో పోలిస్తే గణనీయంగా ఎక్కువ స్థాయి గ్లూటామేట్ తీసుకునేలా చేసింది, లేదా సమానమైన పిసిడిఎన్‌ఎ 3.1 తో బదిలీ చేయబడిన కణాలు. దీనికి విరుద్ధంగా, రెండవ ప్రమోటర్, పి 2, అలాగే ఎక్స్ 2 స్కిప్ మరియు ఎక్స్ 11 స్కిప్ చేత నడపబడే ట్రాన్స్క్రిప్ట్ యొక్క వ్యక్తీకరణ గ్లూటామేట్ రవాణాకు దారితీసింది, ఇది నాన్ట్రాన్స్ఫెక్టెడ్ కణాల కన్నా గణనీయంగా తక్కువగా ఉంది (మూర్తి 3 ఎ). GTRAP3-18, EAAC1 తో బంధించే ప్రోటీన్ మరియు EAAC1 ద్వారా గ్లూటామేట్ రవాణా యొక్క స్థిర నిరోధకం, [ 37] HEK-293 కణాలలో గ్లూటామేట్ రవాణాను కూడా నిరోధించింది (మూర్తి 3a). HEK-293 కణాలు సాధారణంగా EAAC1 తో సహా గ్లూటామేట్ ట్రాన్స్పోర్టర్స్ యొక్క ఎండోజెనస్ స్థాయిలను వ్యక్తపరుస్తాయి. క్రియాశీల గ్లూటామేట్ రవాణాను నిరోధించే DL-TBOA అనే ​​with షధంతో కణాలు చికిత్స చేయబడినప్పుడు గమనించిన నిరోధాన్ని గ్లూటామేట్ తీసుకునే నిరోధం మించలేదు. EAAC1- మధ్యవర్తిత్వ గ్లూటామేట్ తీసుకునే సెల్ లైన్ అయిన హెలా కణాలలో ఐసోఫాంలు వ్యక్తీకరించబడినప్పుడు, 38 క్రియాశీల గ్లూటామేట్ రవాణా గమనించబడలేదు (డేటా చూపబడలేదు). అందువల్ల, ప్రత్యామ్నాయ ఐసోఫాంలు ఎండోజెనస్ EAAC1 గ్లూటామేట్ తీసుకునే ప్రతికూల నియంత్రకాలుగా పనిచేస్తాయి.

Image

EAAC1 ఐసోఫోర్మ్స్ EAAC1 ట్రాన్స్పోర్టర్ నుండి గ్లూటామేట్ రవాణాను నిరోధిస్తాయి. ( ) EAAC1 ఐసోఫాంలు HEK-293 కణాలలో ఎండోజెనస్ గ్లూటామేట్ తీసుకోవడం నిరోధిస్తాయి. సూచించిన DNA యొక్క 60 ng (EAAC1 (P1) యొక్క ప్రాధమిక ట్రాన్స్క్రిప్ట్, ప్రతి EAAC1 ఐసోఫామ్‌లతో (P2, ex2skip లేదా ex11skip) లేదా GTRAP3- తో బదిలీ చేయబడిన HEK-293 కణాలలో సాధారణ గ్లూటామేట్ తీసుకోవడం (30 లేదా 60 నిమి) వర్ణించబడింది. 18), బదిలీ చేయని కణాలు (NT) లేదా క్రియాశీల గ్లూటామేట్ రవాణాను నిరోధించే DL-TBOA అనే ​​with షధంతో చికిత్స పొందిన కణాలు. రెండు స్వతంత్ర ప్రయోగాలలో ( N 6) నిర్వహించిన త్రిపాది పరీక్షల కోసం ఫలితాలు ± sem చూపబడతాయి. * PcDNA3.1 నియంత్రణతో పోల్చితే * P 0.05 మరియు ** P 0.01 (జతచేయని రెండు-తోక టి -టెస్ట్). ( బి ) EAAC1 ఐసోఫాంలు HEK-293 కణాలలో బదిలీ చేయబడిన P1 ట్రాన్స్క్రిప్ట్ నుండి తీసుకోబడిన ఎక్సోజనస్ గ్లూటామేట్ తీసుకోవడం నిరోధిస్తాయి. HEK-293 కణాలు 10 ng P1 తో బదిలీ చేయబడ్డాయి (96 బావుల పలక యొక్క ప్రతి బావిలో) మరియు సూచించిన ఇతర DNA యొక్క పెరుగుతున్న మొత్తాలు. ప్రతి బావిలోని మొత్తం DNA మొత్తాన్ని 60 ng కు pcDNA3.1 ఉపయోగించి సర్దుబాటు చేశారు. ఎక్సోజనస్ గ్లూటామేట్ తీసుకోవడం 100% ఉపయోగించి 10 ng P1 మరియు 0% తో గరిష్టంగా తీసుకోవడం pcDNA3.1 తో మాత్రమే గమనించినట్లుగా సాధారణీకరించబడింది. 30 లేదా 60 నిమిషాల గ్లూటామేట్ తీసుకున్న తర్వాత రెండు స్వతంత్ర ప్రయోగాలలో ( N -6) నిర్వహించిన త్రిపాది పరీక్షల కోసం ఫలితాలు ± సెమ్ చూపబడతాయి. * P 0.05 మరియు ** P 0.01 పోటీదారు లేనప్పుడు గరిష్టంగా తీసుకునేటప్పుడు (జతచేయని రెండు-తోక టి -టెస్ట్). eGFP, మెరుగైన గ్రీన్ ఫ్లోరోసెంట్ ప్రోటీన్.

పూర్తి పరిమాణ చిత్రం

ఐసోఫాంలు వాస్తవానికి EAAC1 ద్వారా గ్లూటామేట్ రవాణా యొక్క ప్రతికూల నియంత్రకాలుగా పనిచేస్తున్నాయని ధృవీకరించడానికి, మేము HEK-293 కణాలలో ప్రాధమిక EAAC1 P1 ట్రాన్స్క్రిప్ట్ను వ్యక్తీకరించాము మరియు ప్రతి ఐసోఫార్మ్ యొక్క పెరుగుతున్న మొత్తాలను సహ-వ్యక్తీకరించాము (మూర్తి 3 బి). బదిలీ చేయబడిన EAAC1 P1 నిర్మాణం (మూర్తి 3 బి) నుండి అన్ని ఐసోఫామ్‌లు ఎక్సోజనస్ గ్లూటామేట్ రవాణాను గణనీయంగా నిరోధించాయి. ప్రతికూల నియంత్రణకు నియంత్రణ అయిన GTRAP3-18, ఎక్సోజనస్ మరియు ఎండోజెనస్ EAAC1 రవాణాను నిరోధించింది, అయితే అసంబద్ధమైన ట్రాన్స్క్రిప్ట్, మెరుగైన గ్రీన్ ఫ్లోరోసెంట్ ప్రోటీన్, గ్లూటామేట్ రవాణాపై ప్రభావం చూపలేదు. అందువల్ల, అన్ని ప్రత్యామ్నాయ ఐసోఫాంలు EAAC1 P1 ట్రాన్స్క్రిప్ట్ ద్వారా గ్లూటామేట్ రవాణాను నిరోధిస్తాయి.

Ex2skip మరియు ex11skip ప్రోటీన్లు ప్రాథమిక P1 ప్రోటీన్‌తో సంకర్షణ చెందుతాయి

SLC1A1 / EAAC1 ట్రిమర్‌గా పనిచేస్తుంది. 39, 40 అందువల్ల, ప్రోటీన్ ఐసోఫాంలు గ్లూటామేట్ రవాణాను నిరోధించే ఒక యంత్రాంగం, క్రియాత్మక ట్రిమెరిక్ ట్రాన్స్పోర్టర్ ఏర్పడటానికి జోక్యం చేసుకోవడం. ఈ అవకాశాన్ని పరిశీలించడానికి, ప్రతి ఐసోఫాంలు పూర్తి-నిడివి గల ప్రోటీన్, పి 1 తో హెలా కణాలను ఉపయోగించి, ఎండోజెనస్ EAAC1 (మూర్తి 4 ఎ) యొక్క వ్యక్తీకరణ లేని కణ రేఖతో కలెక్టలైజ్ అవుతుందా అని మేము మొదట నిర్ణయించాము. 38 P1 ను HA తో ట్యాగ్ చేశారు, అయితే ప్రతి ప్రోటీన్ ఐసోఫామ్‌లను FLAG తో ట్యాగ్ చేశారు, తద్వారా ఈ ప్రోటీన్ల యొక్క ప్రత్యేక విజువలైజేషన్‌ను అనుమతిస్తుంది. [32] ఎక్స్ 2 స్కిప్ మరియు ఎక్స్ 11 స్కిప్ రెండూ పి 1 తో కలెక్టలైజ్ చేయబడ్డాయి, కాని expected హించిన విధంగా, పి 1 / పి 1 కోలోకలైజేషన్ చాలా ఎక్కువ (మూర్తి 4 బి). దీనికి విరుద్ధంగా, పి 2 ప్రోటీన్ ఐసోఫార్మ్ మరియు పి 1 ల మధ్య కోలోకలైజేషన్ గమనించబడలేదు. Ex2skip మరియు ex11skip ప్రోటీన్లు ప్రాధమిక P1 ప్రోటీన్ వలె అదే సెల్యులార్ ప్రాంతాలకు పాక్షికంగా కలెక్టలైజ్ అవుతాయని ఫలితాలు సూచిస్తున్నాయి, అయితే P2 ప్రోటీన్ P1 తో కోలోకలైజేషన్ చూపించదు.

Image

EAAC1 ఐసోఫాంలు పాక్షికంగా కోలోకలైజ్ చేయబడతాయి మరియు బదిలీ చేయబడిన హెలా కణాలలో EAAC1 P1 ప్రోటీన్‌తో సంకర్షణ చెందుతాయి. ( ) సూచించిన విధంగా హెలా కణాలు P1-HA- ట్యాగ్‌కు సమానమైన DNA తో మరియు FLAG- ట్యాగ్ చేయబడిన ఐసోఫార్మ్ (P1, ex2skip, ex11skip, లేదా P2) కు బదిలీ చేయబడ్డాయి. ఈ ప్రయోగంలో హెలా కణాలు ఉపయోగించబడ్డాయి ఎందుకంటే అవి SLC1A1 / EAAC1 ను వ్యక్తపరచవు. హేమాగ్గ్లుటినిన్ (HA) -టాగ్ మరియు FLAG- ట్యాగ్ వరుసగా అలెక్సా 555-కంజుగేటెడ్ యాంటీ రాబిట్ మరియు అలెక్సా 647-కంజుగేటెడ్ యాంటీ-మౌస్ యాంటీబాడీస్ ఉపయోగించి కనుగొనబడ్డాయి మరియు మెటీరియల్ మరియు పద్ధతుల్లో వివరించిన విధంగా కన్ఫోకల్ మైక్రోస్కోపీని ఉపయోగించి దృశ్యమానం చేయబడ్డాయి. సూచించిన విధంగా ప్రతి ఛానెల్‌కు (ఎరుపు = HA; ఆకుపచ్చ = FLAG) కాన్ఫోకల్ చిత్రాలు ఆప్టిమైజ్ చేయబడ్డాయి. ( బి ) వ్యయాల పద్ధతిని ఉపయోగించి, a లో చూపిన ప్రతి కలయికకు FLAG- ట్యాగ్ మరియు HA- ట్యాగ్ కోసం కోలోకలైజేషన్ యొక్క పరిమాణం (± sem). P1 vs P1 కోలోకలైజేషన్తో పోలిస్తే 36 * P 0.05, ** P 0.01 మరియు *** P 0.001. ( సి ) P1-HA- ట్యాగ్‌కు అనుగుణమైన DNA తో బదిలీ చేయబడిన హెలా కణాలు మరియు సూచించిన FLAG- ట్యాగ్ చేయబడిన ఐసోఫార్మ్‌ను 2 రోజుల పోస్ట్ ట్రాన్స్‌ఫెక్షన్ ద్వారా లైస్ చేశారు. అప్పుడు లైసేట్లను FLAG- పూసలతో బంధించి, క్రిందికి లాగి, SDS- పాలియాక్రిలమైడ్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ చేత ప్రోటీన్లు పరిష్కరించబడతాయి. యాంటీ-రాబిట్ యాంటీబాడీని ఉపయోగించి HA- ట్యాగ్ చేయబడిన P1 కనుగొనబడింది (పదార్థాలు మరియు పద్ధతులను చూడండి).

పూర్తి పరిమాణ చిత్రం

ప్రోటీన్ ఐసోఫాంలు ప్రాధమిక పి 1 ప్రోటీన్‌తో భౌతికంగా సంబంధం కలిగి ఉన్నాయో లేదో తెలుసుకోవడానికి, బదిలీ చేయబడిన హెలా కణాలు లైస్ చేయబడ్డాయి మరియు FLAG యాంటీబాడీ పూసలు (మూర్తి 4 సి) ఉపయోగించి ప్రోటీన్ ఐసోఫామ్‌లను లైసేట్ నుండి క్రిందికి లాగారు. ప్రతికూల నియంత్రణ, FLAG- ట్యాగ్ చేయబడిన మెరుగైన గ్రీన్ ఫ్లోరోసెంట్ ప్రోటీన్ HA- ట్యాగ్ చేయబడిన P1 ను క్రిందికి లాగడంలో విఫలమైంది, ఇది రెండు ప్రోటీన్ల మధ్య పరస్పర చర్య లేదని సూచిస్తుంది. Expected హించిన విధంగా, P1-FLAG HA- ట్యాగ్ చేసిన P1 ను ఆసక్తిగా తీసివేసింది. Ex2skip మరియు ex11skip ప్రోటీన్లు కూడా HA- ట్యాగ్ చేసిన P1 ను తీసివేసాయి, కాని P1-FLAG కన్నా కొంతవరకు. చివరగా, P2-FLAG మరియు HA- ట్యాగ్ చేయబడిన P1 మధ్య భౌతిక సంబంధం గమనించబడలేదు. ఈ ఫలితాలు కోలోకలైజేషన్ డేటాకు అనుగుణంగా ఉంటాయి మరియు EAAC1 గ్లూటామేట్ ట్రాన్స్పోర్టర్ యొక్క సరైన అసెంబ్లీలో జోక్యం చేసుకోవడం ద్వారా ex2skip మరియు ex11skip ప్రోటీన్లు గ్లూటామేట్ రవాణాను నిరోధించగలవు అనే ఆలోచనకు మద్దతు ఇస్తుంది.

క్లినికల్ జనాభా నుండి లింఫోసైట్లలో గ్లూటామేట్ సిగ్నలింగ్ యొక్క అవకలన నియంత్రణ

జీవన మెదడుల్లో జన్యు వ్యక్తీకరణ యొక్క విశ్లేషణ సాధ్యం కానందున, మరియు లింఫోసైట్లు SLC1A1 ను మరియు గ్లూటామేట్ సిగ్నలింగ్‌కు సంబంధించిన జన్యువుల హోస్ట్‌ను వ్యక్తీకరిస్తాయి కాబట్టి, అవి నాడీ జన్యు నియంత్రణను పరిశోధించడానికి సర్రోగేట్ మోడల్ సెల్ వ్యవస్థగా పనిచేస్తాయి. అందువల్ల, OCD లో SLC1A1 / EAAC1 ఐసోఫామ్‌ల యొక్క ance చిత్యాన్ని నిర్ణయించడానికి, నియంత్రణ వ్యక్తుల నుండి మరియు OCD కొరకు DSM-IV ప్రమాణాలకు అనుగుణంగా ఉన్న రోగుల నుండి లింఫోసైట్లు వేరుచేయబడ్డాయి. పరిమాణాత్మక జన్యు వ్యక్తీకరణ కోసం సేకరణకు ముందు 24 గం వరకు కణాలు వివిధ కారకాల సమక్షంలో లేదా లేకపోవడంతో మీడియాలో సంస్కృతి చేయబడ్డాయి.

SLC1A1 లింఫోసైట్లలో వ్యక్తీకరించబడినందున, ఈ జన్యువు యొక్క లిప్యంతరీకరణ విశ్లేషించబడింది. నియంత్రణ విషయాల నుండి లింఫోసైట్లలో డోపామైన్ ద్వారా SLC1A1 స్థాయిలు తగ్గాయని మేము గమనించాము (మూర్తి 5a). విశేషమేమిటంటే, OCD ఉన్న సబ్జెక్టులు ఈ తగ్గుదలని ప్రదర్శించలేదు, నియంత్రణలు మరియు OCD ల మధ్య గ్లూటామేట్ రవాణాదారుల అవకలన నియంత్రణను సూచిస్తున్నాయి. అదనంగా, లింఫోసైట్లు ఫ్లూక్సేటైన్ (మూర్తి 5 ఎ) తో చికిత్స చేయబడినప్పుడు నియంత్రణలతో పోలిస్తే SLC1A1 వ్యక్తీకరణ OCD లో గణనీయంగా ఎక్కువగా ఉంది.

Image

అబ్సెసివ్-కంపల్సివ్ డిజార్డర్ (OCD) ఉన్న కంట్రోల్ సబ్జెక్టులు మరియు సబ్జెక్టుల నుండి తీసుకోబడిన మానవ లింఫోసైట్లలోని SLC1A1 ట్రాన్స్క్రిప్ట్స్ యొక్క అవకలన వ్యక్తీకరణ. పరిధీయ లింఫోసైట్లు సంబంధం లేని నియంత్రణలు మరియు OCD ఉన్న వ్యక్తుల నుండి వేరుచేయబడ్డాయి మరియు సూచించిన కారకాలతో సంస్కృతి చేయబడ్డాయి. OCD తో ఉన్న అన్ని సబ్జెక్టులు సిరోటోనిన్ రీఅప్టేక్ ఇన్హిబిటర్లతో చికిత్స చేయబడ్డాయి (ఏదీ యాంటిసైకోటిక్స్లో లేదు) సూచించినట్లుగా OCD తో ఒక drug షధ-అమాయక (అన్‌మెడికేటెడ్) స్త్రీ విషయం తప్ప. మెటీరియల్స్ మరియు పద్ధతుల్లో వివరించిన విధంగా లింఫోసైట్లు ప్రాసెస్ చేయబడ్డాయి. జన్యు వ్యక్తీకరణ స్థాయిలు β2- మైక్రోగ్లోబులిన్ స్థాయిలకు సాధారణీకరించబడ్డాయి, లాగరిథమిక్ స్కేల్‌లో వ్యక్తీకరించబడ్డాయి మరియు ప్రతి వ్యక్తికి చూపించబడ్డాయి. ( ) చికిత్స చేయని పరిస్థితులలో పరిధీయ లింఫోసైట్లలో SLC1A1 / EAAC1 (P1 ట్రాన్స్క్రిప్ట్) యొక్క తులనాత్మక వ్యక్తీకరణ, 1 h M డోపామైన్తో 24 గంటలకు చికిత్స చేయబడుతుంది లేదా 10 μ M ఫ్లూక్సేటైన్ తో 24 h నియంత్రణలు మరియు OCD తో చికిత్స పొందుతుంది. ( బి ) నియంత్రణ లేదా OCD సమూహం నుండి లింఫోసైట్‌లలో ప్రతి SLC1A1 ఐసోఫార్మ్ యొక్క ప్రాథమిక స్థాయి వ్యక్తీకరణ (చికిత్స లేదు). ( సి ) లింఫోసైట్‌లలోని ప్రతి SLC1A1 ఐసోఫార్మ్ యొక్క తులనాత్మక వ్యక్తీకరణ 10 μ M రెటినోయిక్ ఆమ్లంతో 24 గంటలకు చికిత్స పొందుతుంది.

పూర్తి పరిమాణ చిత్రం

SLC1A1 / EAAC1 ఐసోఫాంలు OCD లో తక్కువ వ్యక్తీకరణను చూపించాయి

SLC1A1 ఐసోఫామ్‌లు నియంత్రణల కంటే OCD లో తక్కువ స్థాయిలో వ్యక్తీకరించబడతాయి (గణాంకాలు 5 బి మరియు సి). బేసల్ పరిస్థితులలో నియంత్రణలతో పోల్చితే ఎక్స్ 11 స్కిప్ ఒసిడిలో గణనీయంగా తక్కువ వ్యక్తీకరణను ప్రదర్శిస్తుంది, అయితే ఎక్స్ 2 స్కిప్ మరియు పి 2 ట్రాన్స్క్రిప్ట్ ఒసిడిలో లింఫోసైట్లు రెటినోయిక్ ఆమ్లంతో చికిత్స చేయబడినప్పుడు నియంత్రణల కంటే గణనీయంగా తక్కువ వ్యక్తీకరణను ప్రదర్శిస్తాయి, ఇది లింఫోసైట్లు మరియు నాడీ కణాల పరిపక్వతను పెంచుతుంది. 41, 42 అన్ని SLC1A1 ఐసోఫాంలు SLC1A1 యొక్క ప్రతికూల నియంత్రకాలుగా పనిచేస్తున్నందున, ఫలితాలు నిర్దిష్ట అభివృద్ధి పరిస్థితులలో, OCD ఉన్న సబ్జెక్టులు గ్లూటామేట్ రవాణాను నియంత్రించడానికి ప్రత్యామ్నాయ విధానాలను ఉపయోగిస్తాయని ఫలితాలు సూచిస్తున్నాయి.

చర్చా

స్కిజోఫ్రెనియా, 43 ఆటిజం స్పెక్ట్రం డిజార్డర్, 44 మరియు ఒసిడితో సహా అనేక ప్రధాన న్యూరోసైకియాట్రిక్ రుగ్మతల యొక్క వ్యాధికారకంలో జన్యు, న్యూరోఇమేజింగ్ మరియు క్లినికల్ అధ్యయనాల నుండి పెరుగుతున్న సాక్ష్యం గ్లూటామాటర్జిక్ వ్యవస్థ యొక్క పనిచేయకపోవడాన్ని సూచించింది. 45, 46, 47 బహుశా న్యూరోనల్ గ్లూటామేట్ ట్రాన్స్పోర్టర్ జన్యువు, SLC1A1 / EAAC1, OCD తో సింగిల్-న్యూక్లియోటైడ్ పాలిమార్ఫిజమ్స్ (SNP లు) అనుబంధం. 2006 నుండి ప్రచురించబడిన అనేక జన్యు అధ్యయనాలలో, SLC1A1 / EAAC1 జన్యువులోని SNP ల యొక్క ముఖ్యమైన అనుబంధాలు OCD 20, 21, 22, 23, 24, 25 లేదా స్కిజోఫ్రెనియాలో OCD లక్షణాలలో నివేదించబడ్డాయి. 48, 49 మానసిక జన్యుశాస్త్రంలో బహుళ ప్రతిరూపాలు చాలా అరుదుగా ఉన్నందున ఇది చాలా అసాధారణమైన ఫలితాల సమితి. అదనంగా, స్కిజోఫ్రెనియా 50, 51 మరియు ఆటిజం, 52, 53, 54 రుగ్మతలలో SLC1A1 జన్యువులో SNP ల యొక్క గణనీయమైన సంబంధం నివేదించబడింది, ఇవి కొమొర్బిడ్ లేదా OCD యొక్క లక్షణాలతో అతివ్యాప్తి చెందుతాయి. OCD, స్కిజోఫ్రెనియా మరియు ఆటిజంతో అత్యంత పునరుత్పాదక అనుబంధాలను ప్రదర్శించే SNP లు EAAC1 జన్యువు యొక్క 3 ′ భాగం వైపు ఉన్నాయి, మరియు వీటిలో rs2228622 23, 48, 55 (ఎక్సాన్ 4 లో ఉంది, అంతర్గత ప్రమోటర్ దగ్గర, P2), మరియు rs301979 21, 52 మరియు rs301434 20 (ఎక్సాన్ 11 సమీపంలో ఉంది), మరియు rs3087879 24 (ఎక్సోన్ 12 లో ఉంది), మానసిక రుగ్మతలలో పి 2 ట్రాన్స్క్రిప్ట్ మరియు / లేదా ఎక్స్ 11 స్కిప్ యొక్క ప్రమేయాన్ని సూచిస్తుంది.

ఎక్సిటోటాక్సిసిటీ మరియు న్యూరానల్ మరణాన్ని నివారించడానికి SLC1A1 / EAAC1 గ్లూటామేట్‌ను బాహ్య కణ వాతావరణం నుండి రవాణా చేయడం ద్వారా గ్లూటామేట్ సిగ్నలింగ్‌ను మాడ్యులేట్ చేస్తుంది. అయినప్పటికీ, SLC1A1 యొక్క జన్యు నియంత్రణ మరియు OCD లో సాధ్యమయ్యే పాత్ర అస్పష్టంగా ఉంది. ఇక్కడ, మేము మూడు ఐసోఫామ్‌లను వివరిస్తాము, ఇవన్నీ SLC1A1 / EAAC1 ఫంక్షన్ యొక్క ప్రతికూల మాడ్యులేటర్లుగా పనిచేస్తాయి. Expected హించినట్లుగా, ట్రాన్స్మెంబ్రేన్ ప్రాంతాలలో తొలగింపులను చూస్తే, మూడు ఐసోఫామ్లలో స్వాభావిక గ్లూటామేట్ రవాణా పనితీరు లేదు. ప్రత్యామ్నాయంగా విభజించబడిన రెండు ప్రోటీన్ ఐసోఫాంలు (ex2skip మరియు ex11skip) ప్రాధమిక EAAC1 P1 ప్రోటీన్‌తో సంకర్షణ చెందుతాయి మరియు పాక్షికంగా కలెక్టలైజ్ చేస్తాయి, ఇవి ఫంక్షనల్ ట్రిమెరిక్ ట్రాన్స్‌పోర్టర్ యొక్క అసెంబ్లీని బలహీనపరుస్తాయని సూచిస్తున్నాయి. రెండవ అంతర్గత ప్రమోటర్ నుండి ఉత్పత్తి చేయబడిన మూడవ ఐసోఫార్మ్ (పి 2), EAAC1 P1 ప్రోటీన్‌తో సంకర్షణ చెందదు, ఇది P1 ప్రోటీన్ యొక్క అనువాదంలో జోక్యం చేసుకోవడం ద్వారా RNA స్థాయిలో పనిచేయగలదని సూచిస్తుంది. GTRAP3-18 అనే ప్రోటీన్ SLC1A1 / EAAC1 యొక్క శక్తివంతమైన ప్రతికూల మాడ్యులేటర్. SLC1A1 / EAAC1 ఫంక్షన్ యొక్క అనేక స్వతంత్రంగా పనిచేసే మాడ్యులేటర్ల ఉనికి ఈ ట్రాన్స్పోర్టర్ యొక్క నియంత్రణకు సంక్లిష్టత యొక్క layer హించని పొరను జోడిస్తుంది.

ప్రత్యామ్నాయ ఐసోఫామ్‌లన్నీ మానవులు మరియు ఎలుకల మధ్య పరిణామాత్మకంగా సంరక్షించబడతాయి మరియు అవి మెదడు, లింఫోసైట్లు మరియు మూత్రపిండ కణాలలో నాన్ పాథలాజికల్ పరిస్థితులలో కనుగొనబడ్డాయి. OCD లో పాల్గొన్న మెదడు ప్రాంతమైన స్ట్రియాటంలో ప్రత్యామ్నాయంగా విభజించబడిన EAAC1 mRNA ల యొక్క సాపేక్షంగా అధిక సమృద్ధి ఉంది. [57] దీని ప్రకారం, ఈ ఐసోఫాంలు EAAC1 ఫంక్షన్ యొక్క సహజ నియంత్రకాలుగా పనిచేసే అవకాశం ఉంది.

OCD లో గ్లూటామేట్ డైస్రెగ్యులేషన్ను సూచించే బలమైన సాక్ష్యాలను బట్టి, మేము SLC1A1 యొక్క వ్యక్తీకరణను అధ్యయనం చేయడానికి జీవసంబంధమైన వ్యవస్థను కోరింది. మునుపటి పరిశోధనలో SLC1A1 జన్యువు సమీపంలో ఉన్న SNP లు, OCD తో బలంగా సంబంధం కలిగి ఉన్నాయి, మెదడు మరియు లింఫోబ్లాస్టాయిడ్ కణాలలో SLC1A1 యొక్క వ్యక్తీకరణను అంచనా వేస్తాయి. [24] ఈ అధ్యయనం జన్యు పాలిమార్ఫిజమ్స్ మెదడులోని SLC1A1 యొక్క వ్యక్తీకరణ మరియు నియంత్రణ యొక్క బలమైన నిర్ణయాధికారులు మరియు అమర లింఫోసైట్లు అయిన లింఫోబ్లాస్టాయిడ్ కణాలు అని సూచిస్తున్నాయి. దీని ప్రకారం, మేము SLC1A1 ఐసోఫామ్‌ల నియంత్రణను విశ్లేషించడానికి మానవ లింఫోసైట్‌లను పరిధీయ వ్యవస్థగా ఉపయోగించాము. పరిధీయ లింఫోసైట్లు సులభంగా ప్రాప్తి చేయగలవు మరియు గ్లూటామేట్ జీవశాస్త్రానికి సంబంధించిన ఇతర నాడీ జన్యువులతో సహా ఇక్కడ వివరించిన అన్ని SLC1A1 ఐసోఫామ్‌లను వ్యక్తీకరిస్తాయి. అయితే, ఈ అధ్యయనం యొక్క పరిమితి ఏమిటంటే, OCD ఉన్న దాదాపు అన్ని విషయాలను మందులతో చికిత్స చేశారు.

లింఫోసైట్స్‌లో గ్లూటామేట్ ట్రాన్స్‌పోర్టర్స్ నియంత్రణ మెదడులో గమనించినట్లుగా ఉంటుందని మా ప్రారంభ ఫలితాలు సూచిస్తున్నాయి. Levels of SLC1A1 were decreased by treatment with dopamine in lymphocytes from control subjects, a scenario similar to the downregulation of high-affinity glutamate transport by dopamine in the striatum, a normal physiological response. 58

To determine if there are biological differences in OCD, we asked whether expression of SLC1A1 is differentially regulated in OCD compared with controls. In contrast to controls, there was no significant downregulation of SLC1A1 in dopamine-treated lymphocytes from OCD subjects. Moreover, SLC1A1 transcription was increased in response to fluoxetine in subjects with OCD but showed no change in controls. This is relevant as selective serotonin reuptake inhibitors such as fluoxetine are the main treatment for OCD. Thus, differential regulation of SLC1A1 was observed between OCD and controls.

In addition, differential expression of all SLC1A1 isoforms was observed between OCD and controls. Basal levels of ex11skip were significantly lower in lymphocytes derived from OCD subjects compared with controls. In lymphocytes treated with retinoic acid, expression of all SLC1A1 alternative isoforms was significantly decreased in OCD compared with controls. Thus, all SLC1A1 isoforms show differential regulation in lymphocytes derived from OCD compared with controls.

The differential regulation of the SLC1A1 primary transcript and its isoforms in OCD raises new possibilities regarding the role of glutamate in this disorder. As the isoforms act as negative modulators of SLC1A1 function, lower levels in OCD could represent a mechanism to compensate for increased local concentrations of extracellular glutamate. This notion would fit with prior observations reporting increased glutamate in the cerebrospinal fluid of patients with OCD, 6, 7 imaging studies showing increased levels of glutamate in the caudate nucleus and orbitofrontal cortex, 3, 4 and increased excitability in the brains of individuals with OCD. 59, 60 However, glutamate levels have also been reported to be decreased in the caudate nucleus of pediatric cases of OCD, 1 and decreased in the anterior cingulate gyrus of patients with OCD. 2, 5 Indeed, the notion that only hyperglutamatergic activity underlies OCD symptoms may be too simplistic, as glutamate regulation in the brain is complex. 45 Moreover, glutamatergic neurons are not found in the striatum, 61 suggesting that there may be alternative functions for this neurotransmitter in this region. 45 Our finding that SLC1A1 is regulated by a suite of negatively acting modulators, in addition to GTRAP3-18, 37 is consistent with the complexity of glutamate regulation.

SLC1A1 is also differentially regulated by dopamine and fluoxetine in OCD compared with controls. Whether these are medication-related effects or not will require future studies. Moreover, if glutamate is the primary neurotransmitter involved in OCD, this observation raises the question as to whether the therapeutic effects of medication (that is, selective serotonin re-uptake inhibitors or dopamine antagonists) are in part due to their effects on the regulation of SLC1A1.

To confirm the lymphocyte studies, experiments should be replicated in a larger clinical population, assay conditions optimized and medication effects controlled. Studies in a pediatric population would be informative, as pediatric OCD is more familial, 62 and the potentially confounding effects of illness duration and treatment intervention may be minimized. 63 Future studies will also focus on establishing the role of genetic polymorphisms on the regulation of SLC1A1.

అనుబంధ సమాచారం

PDF ఫైళ్లు

  1. 1.

    అనుబంధ మూర్తి 1

  2. 2.

    అనుబంధ మూర్తి 2

పద పత్రాలు

  1. 1.

    అనుబంధ మూర్తి లెజెండ్స్

  2. 2.

    అనుబంధ పట్టిక 1

    అనువాద సైకియాట్రీ వెబ్‌సైట్ (//www.nature.com/tp) లోని కాగితంతో అనుబంధ సమాచారం