వెంట్రల్ హిప్పోకాంపస్‌లో మంట మరియు వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం ఒత్తిడికి గురికావడానికి దోహదం చేస్తుంది | అనువాద మనోరోగచికిత్స

వెంట్రల్ హిప్పోకాంపస్‌లో మంట మరియు వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం ఒత్తిడికి గురికావడానికి దోహదం చేస్తుంది | అనువాద మనోరోగచికిత్స

Anonim

విషయము

  • మాలిక్యులర్ న్యూరోసైన్స్
  • న్యూరోసైన్స్

నైరూప్య

దీర్ఘకాలిక ఒత్తిడికి గురైనప్పుడు, కొంతమంది వ్యక్తులు చురుకైన కోపింగ్ ప్రవర్తనలలో పాల్గొంటారు, ఇవి ఒత్తిడికి స్థితిస్థాపకతను ప్రోత్సహిస్తాయి. ఇతర వ్యక్తులు నిష్క్రియాత్మక కోపింగ్‌లో పాల్గొంటారు, ఇది ఒత్తిడికి గురికావడం మరియు ఆందోళన మరియు నిరాశతో ముడిపడి ఉంటుంది. ఒత్తిడికి హాని లేదా స్థితిస్థాపకతకు కారణమయ్యే నవల పరమాణు యంత్రాంగాలను గుర్తించే ప్రయత్నంలో, క్రియాశీల (దీర్ఘ-జాప్యం (LL) / స్థితిస్థాపకత) లేదా నిష్క్రియాత్మక () లో భిన్నంగా వ్యక్తీకరించబడిన ఆ miRNA లను గుర్తించడానికి మేము వెంట్రల్ హిప్పోకాంపస్ (vHPC) లోని మైక్రోఆర్ఎన్ఏల యొక్క నిష్పాక్షిక విశ్లేషణలను ఉపయోగించాము. దీర్ఘకాలిక సామాజిక ఓటమి తరువాత చిన్న-జాప్యం (SL) / హాని కలిగించే ఎలుకలు. క్రియాశీల కోపింగ్ ఎలుకల vHPC లో, miR-455-3p స్థాయిని పెంచారు, నిష్క్రియాత్మక కోపింగ్ ఎలుకల vHPC లో miR-30e-3p స్థాయిని పెంచారు. ఈ మైక్రోఆర్ఎన్ఏలచే లక్ష్యంగా ఉన్న జన్యువులచే సమృద్ధిగా గుర్తించబడిన తాపజనక మరియు వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణ మార్గాలను పాత్వే విశ్లేషణలు. VHPC లో రక్త నాళాలు, తాపజనక ప్రక్రియలు మరియు నాడీ కార్యకలాపాల కోసం అనేక స్వతంత్ర గుర్తులను ఉపయోగించడం ద్వారా, SL / హాని కలిగించే ఎలుకలు పెరిగిన నాడీ కార్యకలాపాలు, వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం మరియు తాపజనక ప్రక్రియలను ప్రదర్శిస్తాయని మేము కనుగొన్నాము, ఇందులో రక్తం-మెదడు అవరోధం పారగమ్యత మరియు పెరిగిన మైక్రోగ్లియా రెండూ ఉన్నాయి నియంత్రణ మరియు స్థితిస్థాపక ఎలుకలకు సంబంధించి vHPC. హాని కలిగించే సమలక్షణ అభివృద్ధి కోసం ఈ మార్పుల యొక్క ance చిత్యాన్ని పరీక్షించడానికి, బలహీనత మరియు స్థితిస్థాపకత మధ్యవర్తిత్వం చేయడంలో తాపజనక ప్రక్రియల సహకారాన్ని నిర్ణయించడానికి మేము c షధ విధానాలను ఉపయోగించాము. ప్రో-ఇన్ఫ్లమేటరీ సైటోకిన్ వాస్కులర్ ఎండోథెలియల్ గ్రోత్ ఫ్యాక్టర్ -164 యొక్క పరిపాలన ఒత్తిడికి గురయ్యే అవకాశాన్ని పెంచింది, అయితే స్టెరాయిడ్-కాని శోథ నిరోధక drug షధ మెలోక్సికామ్ దుర్బలత్వాన్ని పెంచుతుంది. సమిష్టిగా, ఈ ఫలితాలు ఒత్తిడికి గురికావడం అనేది తిరిగి రూపొందించిన న్యూరోవాస్కులర్ యూనిట్ ద్వారా నిర్ణయించబడుతుంది, ఇది పెరిగిన నాడీ కార్యకలాపాలు, వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం మరియు VHPC లో శోథ నిరోధక విధానాల ద్వారా వర్గీకరించబడుతుంది. యాంటీ ఇన్ఫ్లమేటరీ ఏజెంట్లను ఇవ్వడం ద్వారా తాపజనక ప్రక్రియలను మందగించడం వల్ల ఒత్తిడికి గురయ్యే అవకాశం తగ్గుతుందని ఈ ఫలితాలు సూచిస్తున్నాయి. యాంటీ ఇన్ఫ్లమేటరీ ఏజెంట్ల పరిపాలన హాని కలిగించే వ్యక్తులలో ఒత్తిడి లేదా గాయం యొక్క ప్రభావాన్ని తగ్గిస్తుందని వారు సూచించినందున ఈ ఫలితాలు అనువాద v చిత్యాన్ని కలిగి ఉన్నాయి.

పరిచయం

దీర్ఘకాలిక ఒత్తిడి మానసిక స్థితిపై తీవ్ర ప్రభావాన్ని చూపుతుంది మరియు నిరాశ మరియు ఆందోళనకు ఎక్కువ ప్రమాదాన్ని ప్రోత్సహిస్తుంది. 1, 2, 3 ఒత్తిడికి గురైన తరువాత నిష్క్రియాత్మక కోపింగ్ స్ట్రాటజీలలో పాల్గొనడం వలన ఒత్తిడి, 4, 5, 6, 7 యొక్క ప్రతికూల ప్రభావాలకు అవకాశం పెరుగుతుంది , అయితే ఒత్తిడితో కూడిన పరిస్థితుల యొక్క చురుకైన కోపింగ్ మరియు గ్రహించిన నియంత్రణ ఒత్తిడి యొక్క ప్రతికూల ప్రభావాలను తగ్గించగలదు. 4, 5, 6, 7 ఎలుకలలో దీర్ఘకాలిక సామాజిక ఓటమి ఒత్తిడి ప్రవర్తన మరియు ఎండోక్రైన్ పనితీరుపై ఒత్తిడి యొక్క తదుపరి ప్రభావాలపై ఒత్తిడి సమయంలో వివిధ కోపింగ్ స్ట్రాటజీల ప్రభావాన్ని అంచనా వేయడానికి ఒక ప్రభావవంతమైన నమూనా. 8, 9 మా మునుపటి పనిలో, చాలా రోజుల సామాజిక ఓటమి తరువాత, మగ స్ప్రేగ్ డావ్లీ ఎలుకలు ఓడిపోయేలా వారి జాప్యాలలో ఒక బిమోడల్ పంపిణీని చూపిస్తాయని మేము చూపించాము. స్వల్ప-జాప్యం (SL / హాని) ఎలుకలు నిష్క్రియాత్మక కోపింగ్ మరియు పెరిగిన ఆందోళన-వంటి మరియు నిస్పృహ-వంటి ప్రవర్తనల ద్వారా వర్గీకరించబడతాయి, అయితే దీర్ఘ-జాప్యం (LL / స్థితిస్థాపక) ఎలుకలు పాల్గొనడం ద్వారా ఓటమి ఒత్తిడి యొక్క ప్రతికూల ప్రభావాల నుండి రక్షించబడుతున్నాయి. చురుకైన కోపింగ్ 'పెరిగిన నిటారుగా ఉన్న భంగిమ మరియు ఓటమికి ప్రతిఘటనతో సహా. 8, 10

స్థితిస్థాపకత లేదా ఒత్తిడికి గురయ్యే నాడీ ఉపరితలాలు చాలా ఆసక్తిని కలిగిస్తాయి. SL / హాని కలిగించే ఎలుకల వెంట్రల్ హిప్పోకాంపస్ (vHPC) లో బాహ్యజన్యు మార్పులు జరుగుతాయని ఇటీవల మేము నిరూపించాము. VHPC కి గాయాలు ఎలుకలలో ఆందోళన-లాంటి ప్రవర్తనను తగ్గిస్తాయి, 12, 13, 14 మరియు VHPC ఆందోళన యొక్క ముఖ్య మధ్యవర్తిగా సూచించబడింది. 12, 13, 14, 15 పెరిగిన విహెచ్‌పిసి కార్యకలాపాలు సామాజిక ఓటమికి గురయ్యే ఎలుకలలో గమనించిన ఆందోళన వంటి రాష్ట్రాలకు లోనవుతాయి. [10] అయినప్పటికీ, స్థితిస్థాపకత లేదా ఒత్తిడికి గురికావడం లేదా ఈ వ్యక్తిగత వ్యత్యాసాలకు మధ్యవర్తిత్వం వహించే vHPC లోని ప్రక్రియలను మధ్యవర్తిత్వం చేయడంలో vHPC యొక్క నిర్దిష్ట పాత్రపై వివరణాత్మక పరిశోధనలు లేవు. ఇక్కడ వివరించిన అధ్యయనాల లక్ష్యం సామాజిక ఓటమికి గురయ్యే ఎలుకల ఆందోళన లాంటి ప్రొఫైల్‌కు లోబడి ఉండే VHPC లోని యంత్రాంగాలను నిర్ణయించడం.

మా ల్యాబ్ నుండి మునుపటి అధ్యయనంలో, మెదడు మరియు రక్తంలోని అనేక మైర్‌ఎన్‌ఎలను గుర్తించాము, అవి స్థితిస్థాపకంగా మరియు హాని కలిగించే ఎలుకల మెదడుల్లో భిన్నంగా వ్యక్తీకరించబడ్డాయి. [10] ఇక్కడ, మేము VHPC లోని miRNA లను పరిశీలించడానికి ప్రయత్నించాము మరియు ఒత్తిడి దుర్బలత్వం మరియు స్థితిస్థాపకతలో పాల్గొన్న నవల మార్గాలను గుర్తించడానికి తదుపరి మార్గాల విశ్లేషణలు.

మెదడులో, మాంద్యం మరియు ఆందోళన వంటి ఒత్తిడి సంబంధిత రుగ్మతలలో మెదడులో మంట యొక్క ఆధారాలు గుర్తించబడ్డాయి. పెరిగిన మైక్రోగ్లియా విస్తరణ మరియు మంట యొక్క ప్రదేశానికి నియామకం, శోథ నిరోధక సైటోకిన్‌ల యొక్క 16 పెరిగిన వ్యక్తీకరణ (Il16, వాస్కులర్ ఎండోథెలియల్ గ్రోత్ ఫ్యాక్టర్ (VEGF) మరియు HMBG1 వంటివి), రక్త-మెదడు అవరోధం (పెరిగిన) BBB) పారగమ్యత మరియు వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం. వయోజన మెదడులో వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణానికి వాపు మాత్రమే కారణమని భావిస్తారు. 17, 18 వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం BBB పారగమ్యత, ఎండోథెలియల్ మొలకెత్తడం మరియు యాంజియోజెనెసిస్, 17, 18 మరియు VEGF వయోజన మెదడులో మంట తరువాత ఈ సంఘటనల యొక్క ప్రాధమిక మధ్యవర్తిగా కనిపిస్తుంది. 17, 19, 20 ఆశ్చర్యకరంగా, నిరంతర నాడీ కార్యకలాపాల తరువాత వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం జరుగుతుంది, 21, 22, 23, 24 మరియు న్యూరానల్ యాక్టివిటీ-ప్రేరిత వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం యొక్క విధానం అస్పష్టంగా ఉన్నప్పటికీ, ఇది VEGF వంటి సైటోకిన్‌ల విడుదలను కలిగి ఉంటుంది. నాడీ కార్యకలాపాల తరువాత వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణాన్ని ప్రేరేపిస్తుందని చూపబడింది. 17, 19, 20, 24, 25, 26 ఈ విధంగా, ఒత్తిడి హాని కలిగించే ఎలుకలలో మేము othes హించినట్లుగా VHPC నాడీ కార్యకలాపాలలో నిరంతర పెరుగుదలను చూపిస్తే, పెరిగిన వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం కూడా సంభవించే అవకాశం ఉంది, అలాగే మంట పెరుగుదల కూడా అంచనా వేయబడింది మైక్రోగ్లియా యొక్క వ్యక్తీకరణ, ప్రో-ఇన్ఫ్లమేటరీ సైటోకిన్స్, యాంజియోజెనిక్ అణువులు మరియు పెరిగిన BBB పారగమ్యత. ఇక్కడ, VHPC లో పెరిగిన న్యూరల్ యాక్టివేషన్‌తో పాటు వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం ద్వారా ఒత్తిడికి గురయ్యే అవకాశం ఉంటుందని మేము hyp హించాము. VHPC లో c షధపరంగా మంటను ప్రేరేపించడం ఒత్తిడికి హానిని కలిగిస్తుందా మరియు మంటను నిరోధించడం పునరుద్ధరణను ప్రోత్సహిస్తుందో లేదో నిర్ణయించడం ద్వారా మేము ఈ పరికల్పనను మరింత పరీక్షించాము.

సామాగ్రి మరియు పద్ధతులు

విషయము

మగ స్ప్రాగ్ డావ్లీ ఎలుకలను (ప్రయోగాత్మక రోజు 1 న 275–300 గ్రా) నియంత్రణ లేదా చొరబాటు ఎలుకలుగా ఉపయోగించారు. మగ లాంగ్-ఎవాన్స్ రిటైర్డ్ పెంపకందారులను (600–800 గ్రా) నివాసితులుగా ఉపయోగించారు. ఎలుకలను చార్లెస్ నది (విల్మింగ్టన్, ఎంఏ, యుఎస్ఎ) నుండి కొనుగోలు చేశారు మరియు ఈ సదుపాయంలోకి ప్రవేశించిన వెంటనే ఒంటరిగా ఉంచారు మరియు అన్ని ప్రయోగాలలో ఒంటరిగా ఉంచారు. ఎలుకలను 12:12 గం కాంతి: డార్క్ షెడ్యూల్ (0700 గం వద్ద లైట్లు) ఆహారం మరియు నీరు అందుబాటులో ఉన్న ప్రకటనలతో ఉంచారు . ప్రయోగాలు ప్రారంభించే ముందు ఎలుకలను యాదృచ్ఛికంగా ప్రయోగాత్మక పరిస్థితులకు కేటాయించారు. అన్ని ప్రయోగాలు 0900 గం మరియు 1300 గం మధ్య జరిగాయి. ఏదైనా పరీక్షకు ముందు ఎలుకలకు అలవాటు పడటానికి కనీసం 1 వారాలు ఇవ్వబడింది, ఈ సమయంలో వాటిని విస్తృతంగా నిర్వహించేవారు. అన్ని విధానాలను ఫిలడెల్ఫియా యొక్క ఇన్స్టిట్యూషనల్ యానిమల్ కేర్ అండ్ యూజ్ కమిటీ యొక్క చిల్డ్రన్స్ హాస్పిటల్ ఆమోదించింది మరియు ప్రయోగశాల జంతువుల ఉపయోగం కోసం నేషనల్ ఇన్స్టిట్యూట్ ఆఫ్ హెల్త్ గైడ్కు అనుగుణంగా ఉంది. మా గతంలో ప్రచురించిన పని ఆధారంగా నమూనాల పరిమాణాలు ఎంపిక చేయబడ్డాయి. 8, 10, 27

సామాజిక ఓటమి ఉదాహరణ మరియు SL / హాని మరియు LL / స్థితిస్థాపక ఎలుకల గుర్తింపు

ఉపయోగించిన సామాజిక ఓటమి ఉదాహరణ క్లాస్ మిజ్సెక్, 28 రూపొందించిన నమూనా నుండి తీసుకోబడింది మరియు ఈ అధ్యయనాలలో ఉపయోగించిన నిర్దిష్ట ఉదాహరణ SL / హాని మరియు LL / స్థితిస్థాపక ఎలుకలను గుర్తించడానికి అనుమతించేది. 8, 9, 29, 30 క్లుప్తంగా, మగ స్ప్రేగ్ డావ్లీ ఎలుకలను చొరబాటుదారులుగా ఉపయోగిస్తారు మరియు దూకుడు కోసం ముందే పరీక్షించబడిన నివాస ఎలుక యొక్క ఇంటి బోనులో ఉంచారు. ఓటమి భంగిమ యొక్క ప్రదర్శనలో, చొరబాటు ఎలుక> 2 సెకన్ల కోసం లొంగిన సుపీన్ స్థానంలో ఉన్నట్లు అంచనా వేయబడింది, ఎలుకలు మిగిలిన సమయం (మొత్తం 30 నిమిషాలు) కోసం వైర్ మెష్ డివైడర్ ద్వారా వేరు చేయబడ్డాయి. దాడులు జరిగితే, మరియు ఓటమి జరగకపోతే, ఎలుకలు 15 నిమిషాలకు వేరు చేయబడ్డాయి మరియు విడిపోయిన సమయం నుండి 30 నిమిషాల వరకు నివాసి యొక్క బోనులో ఉన్నాయి. సామాజిక ఓటమి సంభవించే సమయంలో నియంత్రణ (నాన్‌స్ట్రెస్డ్) ఎలుకలను 30 నిమిషాలు నవల బోనుల్లో ఉంచారు. SL / హాని మరియు LL / స్థితిస్థాపక ఎలుకలను గుర్తించడానికి (బొమ్మలు / ఫిగర్ లెజెండ్‌లలో SL లేదా LL గా మాత్రమే ప్రాతినిధ్యం వహిస్తుంది, కానీ SL / హాని మరియు LL / టెక్స్ట్‌లో స్థితిస్థాపకంగా ఉంటుంది), 7 రోజుల వ్యవధిలో ప్రతి ఎలుక యొక్క సగటు జాప్యం ప్రవేశించింది ఓటమి లాటెన్సీల సగటుపై క్లస్టర్ విశ్లేషణలను నిర్వహించడానికి ఉపయోగించే R స్క్రిప్ట్ (www.github.com/cookpa/socialdefeat వద్ద కోడ్ అందుబాటులో ఉంది). విశ్లేషణ స్థితిస్థాపకత కోసం సంభావ్యతలను అందిస్తుంది, 1 స్థితిస్థాపకతను సూచిస్తుంది మరియు 0 హానిని సూచిస్తుంది. స్క్రీనింగ్ సమయంలో, 0.10 మరియు 0.9 మధ్య విలువ కలిగిన ఎలుకలను ప్రయోగాల నుండి తొలగించారు.

సామాజిక పరస్పర చర్య

మా గతంలో ప్రచురించిన ప్రోటోకాల్ ఉపయోగించి సామాజిక సంకర్షణ పరీక్ష జరిగింది. క్లుప్తంగా, ప్రయోగాత్మక ఎలుకలను ఒక నవల గదిలో ఉంచారు మరియు బాగా సాంఘికీకరించిన ఉద్దీపన ఎలుకతో (సారూప్య వయస్సు గల మగ స్ప్రేగ్ డావ్లీ) అన్వేషించడానికి మరియు సంభాషించడానికి 10 నిమిషాలు అనుమతించారు. ప్రయోగాత్మక ఎలుక ఉద్దీపన ఎలుకతో సంభాషించడానికి గడిపిన సమయాన్ని బట్టి పరస్పర చర్యలను కొలుస్తారు. సాంఘిక పరస్పర చర్యల శాతం సమూహ పరిస్థితులకు అంధుడైన ఒక ప్రయోగికుడు కోడ్ చేశారు.

ప్రయోగం 1: ఒత్తిడి దుర్బలత్వం మరియు స్థితిస్థాపకత యొక్క నవల ఉపరితలాలను నిర్ణయించడానికి miRNA శ్రేణి

SL / LL సమలక్షణాలను బహిర్గతం చేయడానికి ఎలుకలు 7 రోజులు సామాజిక ఓటమికి గురయ్యాయి. వేగవంతమైన శిరచ్ఛేదం ద్వారా చివరి ఓటమి తర్వాత ఎలుకలు 24 గంటలు చంపబడ్డాయి, VHPC వెంటనే విచ్ఛిన్నమైంది మరియు 2-మిథైల్-బ్యూటేన్ (సప్లిమెంటరీ టేబుల్ 1) లో ఫ్లాష్ స్తంభింపజేయబడింది. రక్తం మరియు కణజాల నమూనాల నుండి మొత్తం RNA ను బయోటిన్ లేబుల్ చేయడానికి ఫ్లాష్ ట్యాగ్ బయోటిన్ HSR RNA లేబులింగ్ కిట్ (అఫిమెట్రిక్స్, శాంటా క్లారా, CA, USA) ఉపయోగించబడింది. 250 ng కణజాలం-ఉత్పన్నమైన RNA ను అఫిమెట్రిక్స్ జీన్‌షిప్ మైక్రోఆర్ఎన్ఎ 3.0 శ్రేణులపై విశ్లేషించారు. మా గుంపు నుండి మునుపటి ప్రచురణలో మిఆర్ఎన్ఎ డేటా యొక్క మరింత విశ్లేషణలు వివరంగా వివరించబడ్డాయి. స్వచ్ఛత కోసం ప్రామాణిక 260/280 మరియు 260/230 శ్రేణులను ఉపయోగించి 10 RNA నాణ్యతను అంచనా వేశారు. సరళత నుండి విచలనం ఆధారంగా (2 కంటే తక్కువ లాగ్ 2 తీవ్రత విలువ), హైబ్రిడైజేషన్ తీవ్రతలు నమ్మదగినవి కావు అని ప్రోబ్ సెట్లను తొలగించిన తరువాత మొత్తం 347 మైక్రోఆర్ఎన్ఏలను మేము విశ్లేషించాము. తప్పుడు ఆవిష్కరణ రేటును నియంత్రించడానికి ఫలితాలకు బెంజమిని-హోచ్బెర్గ్ దిద్దుబాటు వర్తించబడింది, మరియు సర్దుబాటు చేయబడిన P- విలువ <0.1 తో ఏదైనా మైక్రోఆర్ఎన్ఎ ముఖ్యమైనదని మేము భావించాము. గుర్తించిన miRNA లచే ప్రభావితమవుతుందని icted హించిన జీవశాస్త్రపరంగా ముఖ్యమైన మార్గాలను అంచనా వేయడానికి చాతుర్యం పాత్వే విశ్లేషణ (IPA) సాఫ్ట్‌వేర్ ఉపయోగించబడింది.

ప్రయోగం 2: vHPC లో వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణానికి మధ్యవర్తిత్వం చేసే జన్యువుల వ్యక్తీకరణ

వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణంలో పాల్గొన్న పెద్ద సంఖ్యలో జన్యువులను ఏకకాలంలో ప్రొఫైల్ చేయడానికి, తయారీదారు సూచనల మేరకు యాంజియోజెనిసిస్ కోసం మేము కియాజెన్ యొక్క RT 2 ప్రొఫైలర్ PCR అర్రేను ఉపయోగించాము. ఈ శ్రేణి 84 స్థాపించబడిన తాపజనక మరియు యాంజియోజెనిక్ జన్యువులను లక్ష్యంగా చేసుకుంటుంది (ఫలితాల పూర్తి జాబితా అనుబంధ పట్టిక 2 లో చేర్చబడింది). Qiagen యొక్క PCR అర్రే డేటా అనాలిసిస్ వెబ్ పోర్టల్ PCR T పద్ధతిని ఉపయోగించి PCR ఫలితాలను లెక్కించడానికి మరియు గణాంక విశ్లేషణలను చేయడానికి ఉపయోగించబడింది. డేటా నాణ్యత నియంత్రణలో ఉంది మరియు శ్రేణులలో చేర్చబడిన అంతర్గత నియంత్రణలు మరియు హౌస్ కీపింగ్ జన్యువులకు సాధారణీకరించబడింది.

ప్రయోగం 3: సామాజిక ఓటమి తరువాత ఎలుకల vHPC లో రక్తనాళాల సాంద్రత గుర్తులను అంచనా వేయడం

మెదడులోని రక్త నాళాలను అంచనా వేయడానికి, వాన్ విల్లేబ్రాండ్ ఫాక్టర్ (విడబ్ల్యుఎఫ్), గ్లూకోజ్ ట్రాన్స్‌పోర్టర్ -1 (గ్లూటి 1) మరియు ఫ్లోరోసెసిన్ ఐసోథియోసైనేట్ (ఎఫ్‌ఐటిసి) లేబుల్ చేసిన రక్త నాళాలతో సహా మూడు రక్తనాళాల గుర్తులను పరిశీలించాము. విడబ్ల్యుఎఫ్ మరియు గ్లూటి 1 అంచనా కోసం, ఎలుకలు ఎస్ఎల్ / ఎల్ఎల్ పరిస్థితులను బహిర్గతం చేయడానికి 7 రోజులు సామాజిక ఓటమికి గురయ్యాయి మరియు తుది సామాజిక ఓటమి తరువాత 24 గంటలు చంపబడ్డాయి. మెదడులను ఇమ్యునోహిస్టోకెమిస్ట్రీ (IHC) కోసం 20 μm విభాగాలలో ముక్కలు చేశారు లేదా వెస్ట్రన్ బ్లాట్ విశ్లేషణ కోసం పంచ్ చేసి ఉపయోగించారు. IHC నుండి వచ్చిన చిత్రాలను లైకా DM4500 మైక్రోస్కోప్‌లో తీశారు. ప్రతి జంతువు కోసం రెండు చిత్రాలు తీయబడ్డాయి, వీటిలో ప్రతి ఒక్కటి dHPC లేదా vHPC కలిగి ఉంటుంది (పరిశీలించిన అక్షాంశాలను చూపించే అనుబంధ మూర్తి 1 చూడండి). పరిస్థితులకు అంధుడైన ఒక ప్రయోగికుడు ప్రతి విభాగం యొక్క ఎడమ మరియు కుడి వైపున ఉన్న Iba1-, FosB- లేదా VWF- ఇమ్యునోపోజిటివ్ కణాల సంఖ్యను లెక్కించాడు. ప్రతి ప్రాంతానికి ఈ విలువల సగటు గణాంకపరంగా విశ్లేషించబడింది. గ్లూటి 1 (అబ్కామ్, కేంబ్రిడ్జ్, యుకె, క్యాట్. నం. ఎబి 652) వ్యక్తీకరణను వెస్ట్రన్ బ్లాటింగ్, 27, 31 ద్వారా అంచనా వేశారు మరియు ప్రతి బ్యాండ్‌లు (45 కెడి ఆస్ట్రోసైటిక్ ఐసోఫార్మ్, మరియు 55 కెడి ఎండోథెలియల్ ఐసోఫార్మ్) β- ఆక్టిన్ సాంద్రతకు (సిగ్మా) సాధారణీకరించబడ్డాయి., సెయింట్ లూయిస్, MO, USA, పిల్లి. నం A2228). ద్వితీయ ప్రతిరోధకాలు మేక యాంటీ రాబిట్ IRDYE 800CW మరియు మేక యాంటీ-మౌస్ IRDYE 680RD. లైకర్ ఒడిస్సీ ఇన్‌ఫ్రారెడ్ ఇమేజర్‌పై పొరలను విశ్లేషించారు. ఇమేజ్‌జేలో డెన్సిటోమెట్రీ ద్వారా బ్యాండ్ తీవ్రతను కొలుస్తారు, మరియు inter- ఆక్టిన్ బ్యాండ్‌లకు సాధారణీకరించిన తరువాత ఇంటర్‌జెల్ పోలికలను అనుమతించడానికి ప్రతి పొరపై నియంత్రణ విలువలు శాతం ద్వారా మరింత సాధారణీకరించబడతాయి. VWF 28, 29 (సిగ్మా, క్యాట్. నం. F3520) కొరకు రక్త నాళాలను IHC అంచనా వేసింది మరియు చికిత్స సమూహాలకు అంధులైన ప్రయోగాలు చేసేవారు VWF- ఇమ్యునోస్టెయిన్డ్ రక్త నాళాల సగటు సంఖ్యను లెక్కించారు. గతంలో ప్రచురించిన ప్రోటోకాల్ ప్రకారం 7 వ డి సామాజిక ఓటమి తరువాత రక్త నాళాల ఎఫ్‌ఐటిసి లేబులింగ్‌ను ఎలుకల ప్రత్యేక సమూహంలో నిర్వహించారు. 32, 33, 34 FITC యొక్క ఇంట్రాకార్డియాక్ పెర్ఫ్యూజన్ మెదడులోని రక్త నాళాలను విశ్వసనీయంగా మరక చేస్తుంది (ఎండోథెలియల్ సెల్ న్యూక్లియైస్ 33 ను మరక చేయడం ద్వారా), మరియు పెర్ఫ్యూజన్ తరువాత ఎక్స్‌ట్రాసెల్యులర్ FITC తీవ్రతను కొలవడం ద్వారా BBB పారగమ్యతను అంచనా వేయడానికి ఉపయోగించవచ్చు. 32, 33, 34 దీర్ఘకాలిక సామాజిక ఓటమి తరువాత, ఎలుకలను 5 మి.లీ.కు 50 మి.లీ ఎఫ్.ఐ.టి.సి (10 మి.లీ. ఫాస్ఫేట్-బఫర్డ్ సెలైన్కు 1 మి.గ్రా ఎఫ్.ఐ.టి.సి) తో ఇంట్రాకార్డియాక్లీ పెర్ఫ్యూజ్ చేసి, ఆపై 2-మిథైల్బుటేన్లో మెదళ్ళు వేగంగా స్తంభింపజేయబడ్డాయి. పారాఫార్మల్డిహైడ్ పెర్ఫ్యూజన్ FITC పెర్ఫ్యూజన్ తరువాత ఉపయోగించబడలేదు ఎందుకంటే పారాఫార్మల్డిహైడ్తో FITC తరువాత పెర్ఫ్యూజన్ FITC యొక్క వ్యాప్తికి కారణమవుతుంది మరియు తప్పుడు ప్రతికూల ఫలితాలకు దారితీస్తుంది. [34 ] మెదడులను 50 μm ముక్కలుగా విభజించారు మరియు వెంటనే ఒలింపస్ ఫ్లోవ్యూ FV1000 కాన్ఫోకల్ మైక్రోస్కోప్‌లో FITC ఫిల్టర్‌ను ఉపయోగించి చిత్రించారు మరియు చిత్రాల అంతటా ఫ్లోరోసెంట్ తీవ్రతను పోల్చడానికి అనుమతించడానికి ప్రతి చిత్రానికి ఒకేలాంటి సెట్టింగులు ఉపయోగించబడ్డాయి. ImageJ లో Z- స్టాక్ చిత్రాలు సృష్టించబడ్డాయి.

ప్రయోగం 4: సామాజిక ఓటమి తరువాత తాపజనక గుర్తులను మరియు BBB పారగమ్యత గుర్తులను కొలవడం

మేము రెండు వేర్వేరు గుర్తులతో BBB పారగమ్యతను పరిశీలించాము (VHPC లో FITC విపరీతత మరియు S100β యొక్క ప్లాస్మా స్థాయిలు) మరియు మైక్రోగ్లియా పరిమాణాన్ని (ఇబా 1-ఇమ్యునో పాజిటివ్ మైక్రోగ్లియా సంఖ్య) మంట యొక్క మరింత విలక్షణమైన మార్కర్‌గా అంచనా వేసాము. 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 ఎఫ్‌ఐటిసి ఎక్స్‌ట్రావాసేషన్, గతంలో అనేక ఇతర అధ్యయనాలలో బిబిబి పారగమ్యతను అంచనా వేయడానికి ఉపయోగించబడింది 32, 33, 34 ప్రయోగంలో పైన సేకరించిన చిత్రాల నుండి విశ్లేషించబడింది 3. ఎఫ్‌ఐటిసి విపరీతతను అంచనా వేయడానికి, జెడ్-స్టాక్ ఇమేజ్‌జేలో చిత్రాలు తెరవబడ్డాయి మరియు విశ్లేషణ నుండి రక్త నాళాలలో ఉన్న ఫ్లోరోసెన్స్‌ను తొలగించడానికి ప్రతి రక్తనాళాల రూపురేఖల కోసం ఒక ముసుగు సృష్టించబడింది. MATLAB ప్రోగ్రామ్ (అభ్యర్థనపై అందుబాటులో ఉన్న కోడ్) ఉపయోగించి ప్రతి నౌక వెలుపల FITC మొత్తాన్ని విశ్లేషించారు. ఈ కార్యక్రమం 1 μm వ్యవధిలో రక్త నాళాల లోపల మరియు వెలుపల ఫ్లోరోసెంట్ తీవ్రతను గుర్తించడం మరియు పరిమాణాన్ని అందించింది. ముఖ్యముగా, ఈ ప్రోగ్రామ్ యొక్క చక్కటి ప్రాదేశిక తీర్మానం ప్రతి నౌక దగ్గర FITC విస్తరణను చూడటానికి మాకు వీలు కల్పించింది, తద్వారా విషయాల మధ్య మొత్తం రక్తనాళాల వ్యక్తీకరణలో తేడాలు ఉండటం వల్ల సంభవించే సంభావ్య పక్షపాతాన్ని తొలగిస్తుంది. సాధారణీకరణ కోసం సమూహ పీఠభూములను Y = 0 వద్ద ఉంచడానికి ప్రతి షరతులో నేపథ్యం తీసివేయబడుతుంది. BBB పారగమ్యత యొక్క పరిపూరకరమైన విశ్లేషణ కోసం, మేము ప్లాస్మా S100β ను ELISA చే పరిశీలించాము (అబ్నోవా, తైపీ, తైవాన్, పిల్లి. నం. KA0037). S100β అనేది కరిగే ఆస్ట్రోసైటిక్ ప్రోటీన్, ఇది పెరిగిన BBB పారగమ్యతను ప్రతిబింబిస్తుంది. 24, 36, 42, 43, 44, 45, 46, 47 మరియు 48 ఇబా 1 ఐహెచ్‌సి (వాకో, రిచ్‌మండ్, విఎ, యుఎస్ఎ, క్యాట్. నం. 019-19741) ఈ ప్రయోగంలో ఎఫ్‌ఐటిసి ఇంజెక్ట్ చేసిన ఎలుకల విభాగాలపై ప్రదర్శించారు, మరియు Iba1- వ్యక్తీకరించే కణాల సంఖ్యను ImageJ లో ఒక ప్రయోగికుడు పరిస్థితులకు అంధంగా లెక్కించారు.

ప్రయోగం 5: ఆందోళన వంటి ప్రవర్తన మరియు ఒత్తిడికి ప్రతిస్పందనలలో పాల్గొన్న మెదడు ప్రాంతాలలో నాడీ కార్యకలాపాలను అంచనా వేయడం

నాడీ కార్యకలాపాల్లో దీర్ఘకాలిక మార్పులను అంచనా వేయడానికి, మేము ఐహెచ్‌సి స్టెయినింగ్ (ప్రయోగం 3 లో వివరించిన విధంగా) న్యూరల్ యాక్టివిటీ మార్కర్ FosB / osFosB (శాంటా క్రజ్ బయోటెక్నాలజీ క్యాట్. నం. Sc-48) ను ప్రదర్శించాము, ఇది దీర్ఘకాలిక నాడీ కార్యకలాపాలను పెంచుతుంది. [49] మేము VHPC (CA1 మరియు CA3 రెండూ), బాసోలెటరల్ అమిగ్డాలా మరియు ప్రిఫ్రంటల్ కార్టెక్స్‌లో నాడీ కార్యకలాపాలను పరిశీలించాము, ఎందుకంటే ఈ ప్రాంతాలు ఒత్తిడికి ప్రతిస్పందనలలో మరియు ఆందోళన లాంటి ప్రవర్తనలలో పాల్గొంటాయి. CA1 మరియు CA3 ప్రాంతాలలో నాడీ కార్యకలాపాల యొక్క వివిధ నమూనాలను అనుసరించి క్రియాత్మక తేడాలు ఉండవచ్చు కాబట్టి 12, 13, 14, 15, 50, 51 CA1 మరియు CA3 ఉపప్రాంతాలు విడిగా అంచనా వేయబడ్డాయి. 52, 53, 54

ప్రయోగం 6: ప్రో-ఇన్ఫ్లమేటరీ సైటోకిన్స్ పంపిణీ యొక్క ప్రభావాలను పరీక్షించడం

నివాస చొరబాటు పనిలో ఉన్న అమాయక ఎలుకలలో హానిని ప్రేరేపించడానికి వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం మరియు మంట పెరుగుతున్నదా అని పరీక్షించడానికి VEGF164 ఉపయోగించబడింది. VEGF164 మంటను ప్రేరేపిస్తుంది, BBB పారగమ్యతను పెంచుతుంది మరియు ఎలుక మెదడులో వాస్కులర్ సాంద్రతను పెంచుతుంది. 17, 55, 56 మైక్రోఇన్‌జెక్షన్ కాన్యులా అమర్చడానికి సవివరమైన శస్త్రచికిత్సా విధానాలు మరెక్కడా ప్రచురించబడ్డాయి. 27, 31 ఎలుక పున omb సంయోగం VEGF164 (సెల్ సిగ్నలింగ్, డాన్వర్స్, MA, USA) లేదా వాహన నియంత్రణ (ఫాస్ఫేట్-బఫర్డ్ సెలైన్) యొక్క రెండు వందల నానోగ్రాములు ఎడమ పార్శ్వ జఠరికలో నిర్వహించబడతాయి (బ్రెగ్మా నుండి: పృష్ఠ 1.1 మిమీ, పార్శ్వ 1.5 మిమీ, వెంట్రల్ 3.2 mm) సామాజిక ఓటమి యొక్క 5 రోజులలో 1 గం ముందు ఓటమి వద్ద 1 μl వాల్యూమ్‌లో. 6 వ రోజు, మేము సామాజిక పరస్పర చర్య కోసం ఎలుకలను పరీక్షించాము (పైన వివరించబడింది). సామాజిక పరస్పర చర్య తర్వాత 24 గంటలకు ఎలుకలు చంపబడ్డాయి. పైన వివరించిన విధంగా VWF, Iba1 మరియు FosB / osFosB కొరకు IHC ప్రదర్శించబడింది.

ప్రయోగం 7: స్థితిస్థాపకతను ప్రోత్సహించడానికి శోథ నిరోధక treatment షధ చికిత్స యొక్క ప్రభావాలను పరీక్షించడం

SL / హాని కలిగించే ఎలుకలను గుర్తించడానికి అమాయక ఎలుకలను 4 రోజులు సామాజికంగా ఓడించారు. 5-7 SL / హాని కలిగించే ఎలుకలు మరియు నియంత్రణ ఎలుకలలో 1 mg kg −1 మెలోక్సికామ్, స్టెరాయిడ్ కాని శోథ నిరోధక with షధంతో చికిత్స పొందారు, ఇది కాక్స్ -2 ని కొన్ని మోతాదులలో నిరోధించవచ్చు లేదా రోజువారీ సామాజిక ఓటమికి 1 గంటకు ముందు సెలైన్ వాహనం ఇంట్రాపెరిటోనియల్‌గా . 8 వ రోజు, ఎలుకలు సామాజిక పరస్పర చర్య కోసం పరీక్షించబడ్డాయి, తరువాత వేగంగా శిరచ్ఛేదం ద్వారా చంపబడ్డాయి. శోథ ప్రక్రియల నిరోధం మరియు వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణాన్ని మెలోక్సికామ్‌తో చికిత్సను ధృవీకరించడానికి మేము VWF మరియు Iba1 ని పరిశీలించాము, ఈ ప్రయోగం యొక్క ఉద్దేశ్యం ఏమిటంటే, ఒత్తిడికి గురయ్యేవారిగా ఇప్పటికే గుర్తించబడిన జంతువులను కేంద్ర మంటను తగ్గించడానికి మరియు పరిధీయంగా నిర్వహించే శోథ నిరోధక మందుతో చికిత్స చేయవచ్చో లేదో నిర్ణయించడం. ప్రవర్తనా హాని, ఎందుకంటే ఈ అన్వేషణకు గొప్ప అనువాద .చిత్యం ఉంటుంది. ప్రాథమిక ప్రయోగాలు VEGF యాంటీబాడీ లేదా VEGF రిసెప్టర్ వంటి ఇతర pharma షధ విధానాలను అంచనా వేసింది. ఇవి కరిగించడం కష్టం మరియు anti హించిన శోథ నిరోధక ప్రభావాలను ఉత్పత్తి చేయలేదు మరియు అందువల్ల మరింత పరిగణించబడలేదు. పరిధీయంగా నిర్వహించబడే మెలోక్సికామ్ హిప్పోకాంపస్, 57 లో మంటను నిరోధిస్తుంది మరియు మెలోక్సికామ్ ఒత్తిడి దుర్బలత్వాన్ని తగ్గిస్తుందని మేము hyp హించాము.

గణాంక విశ్లేషణలు

రెండు సమూహాల గణాంక పోలికల కోసం, మేము విద్యార్థుల టి -టెస్ట్ ఉపయోగించాము; మరియు రెండు కంటే ఎక్కువ సమూహాల పోలికల కోసం, మేము బోన్ఫెరోని పోస్ట్ హాక్ పరీక్షల తరువాత వైవిధ్యం యొక్క విశ్లేషణను ఉపయోగించాము. ప్రాముఖ్యత కోసం .05 స్థాయి 0.05 (రెండు తోక) సెట్ చేయబడింది. ఫిగర్ లెజెండ్స్లో మరింత వివరంగా ఇవ్వబడింది. అన్ని గణాంక విశ్లేషణలు SPSS వెర్షన్ 17, R (IBM, అర్మోంక్, NY, USA) లేదా గ్రాప్‌ప్యాడ్ ప్రిజం 5 లో చేయబడ్డాయి.

ఫలితాలు

ప్రయోగం 1: SL / హాని ఎలుకల vHPC లో మంట మరియు వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణంతో సంబంధం ఉన్న miRNA ల గుర్తింపు

రెండు మైక్రోఆర్ఎన్ఏలు ఎస్ఎల్ / హాని మరియు ఎల్ఎల్ / స్థితిస్థాపక ఎలుకల మధ్య గణనీయంగా భిన్నంగా ఉన్నాయి. SL ఎలుకలతో పోలిస్తే LR లో miR-455-3p స్థాయిలు గణనీయంగా ఎక్కువగా ఉన్నాయి మరియు ఓటమి జాప్యం (గణాంకాలు 1a మరియు b) తో సానుకూలంగా సంబంధం కలిగి ఉన్నాయి. SL / హాని కలిగించే ఎలుకలతో పోలిస్తే LL / స్థితిస్థాపక ఎలుకలలో miR-30e-3p గణనీయంగా తక్కువగా ఉంది మరియు ఓటమి జాప్యం (గణాంకాలు 1 సి మరియు డి) తో ప్రతికూలంగా సంబంధం కలిగి ఉంది. రోగనిరోధక ప్రతిస్పందనలలో miR-30e-3p మరియు miR-455-3p రెండూ పాత్ర కలిగి ఉండవచ్చని సూచించే తాపజనక మరియు రోగనిరోధక ప్రక్రియలతో IPA గణనీయమైన అనుబంధాన్ని వెల్లడించింది. నెట్‌వర్క్‌లో miR-30e-3p ని పెంచడం ద్వారా SL / హాని పరిస్థితి IPA లో అనుకరించబడింది, దీని ఫలితంగా రోగనిరోధక ప్రతిస్పందన యొక్క క్రియాశీలత అంచనా వేయబడింది (అనుబంధ మూర్తి 2). పెరిగిన miR-30e-3p మరియు miR-455-3p తగ్గిన ఫలితాన్ని మేము పరిశీలించినప్పుడు, వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం SL- మోడల్ స్థితిలో గణనీయంగా నియంత్రించబడిందని మేము గుర్తించాము (అనుబంధ మూర్తి 3). నెట్‌వర్క్‌లో మిఆర్ -455-3 పిని పెంచడం మరియు మిఆర్ -30 ఇ -3 పిని తగ్గించడం ద్వారా ఎల్‌ఎల్ కండిషన్ అనుకరించబడింది, దీని ఫలితంగా రోగనిరోధక ప్రతిస్పందన యొక్క నిరోధం మరియు వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం యొక్క నిరోధం అంచనా వేయబడింది (అనుబంధ మూర్తి 4). ఈ ఫలితాల ఆధారంగా, VHPC లో పెరిగిన వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం మరియు తాపజనక ప్రక్రియలతో దుర్బలత్వం ముడిపడి ఉంటుందని మేము icted హించాము.

Image

SL / హాని ఎలుకల vHPC లో వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణంతో సంబంధం ఉన్న miRNA లు మరియు RNA లు పెరిగాయి. ( ) SL / హాని కలిగించే ఎలుకలతో పోలిస్తే LL / స్థితిస్థాపక ఎలుకలు miR-455-3p స్థాయిలను ప్రదర్శించాయి (సమూహానికి n = 5–7; F 2, 15 = 11.49, P = 0.0009). ( బి ) ఓడించాల్సిన సగటు జాప్యం ( r = 0.79, P <0.001) తో miR-455-3p స్థాయిల మధ్య గణనీయమైన సానుకూల సంబంధం ఉంది. ( సి ) ఎస్‌ఎల్ / హాని కలిగించే ఎలుకలతో పోలిస్తే ఎల్‌ఎల్ / స్థితిస్థాపక ఎలుకలు విహెచ్‌పిసిలో మిఆర్ -30 ఇ -3 పి స్థాయిలను ప్రదర్శించాయి (సమూహానికి n = 5–7; ఎఫ్ 2, 15 = 11.12, పి = 0.01). ( d ) ఓడించాల్సిన సగటు జాప్యం ( r = .0.86, P <0.001) తో miR-30e-3p స్థాయిల మధ్య గణనీయమైన ప్రతికూల సంబంధం ఉంది. A మరియు c కొరకు, డేటా సగటు ± sem ( e ) SL / దుర్బలమైన మరియు LL / స్థితిస్థాపక ఎలుకలలోని డాష్ చేసిన పంక్తి సూచించిన నియంత్రణ నుండి రెట్లు మార్పును చూపిస్తుంది (లోపం పట్టీలు సెమ్‌ను సూచిస్తాయి). * పి <0.05. 'A' అనే అక్షరం నియంత్రణకు సంబంధించి గణాంక ప్రాముఖ్యతను సూచిస్తుంది మరియు 'b' SL కి సంబంధించి గణాంక ప్రాముఖ్యతను సూచిస్తుంది. LL, దీర్ఘ జాప్యం; miRNA, మైక్రోఆర్ఎన్ఎ; SL, చిన్న జాప్యం; vHPC, వెంట్రల్ హిప్పోకాంపస్.

పూర్తి పరిమాణ చిత్రం

ప్రయోగం 2: SL / హాని ఎలుకల vHPC లో వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణ గుర్తులను వ్యక్తీకరించడంలో మార్పులు

వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం యొక్క గుర్తులను విస్తృతంగా అంచనా వేయడానికి, మేము వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణంతో సంబంధం ఉన్న వివిధ రకాల లక్ష్యాలను పరిశీలించడానికి రూపొందించిన శ్రేణిని ఉపయోగించి SL / హాని మరియు LL / స్థితిస్థాపక ఎలుకల నుండి vHPC కణజాలాన్ని పరిశీలించాము (మూర్తి 1e). SL / హాని కలిగించే ఎలుకలలో, ఎనిమిది ప్రత్యేకమైన లక్ష్యాలు నియంత్రణల నుండి భిన్నంగా ఉన్నాయి, వీటిలో ఆరు లక్ష్యాలు నియంత్రించబడ్డాయి ( Cxcl1 , Mapk14 , Nrp2 , Pdgfa , Pecam1 , Hgf ). అణగదొక్కబడిన రెండు లక్ష్యాలు ఇఫ్ంగ్ మరియు ప్లా . ఎల్‌ఎల్ ఎలుకలలో మూడు లక్ష్యాలు మాత్రమే నియంత్రణల నుండి గణనీయంగా భిన్నంగా ఉన్నాయి. నియంత్రణలకు సంబంధించి ఎల్‌ఎల్ ఎలుకలలో ఫిగ్ఫ్ మరియు యాంజియోజెనెసిస్ టిమ్ప్ 2 మరియు టిమ్‌పి 3 యొక్క రెప్రెసర్‌లను పెంచారు. 58, 59, 60 ఫిగ్ఫ్ సహా ఎస్ఎల్ / హాని మరియు ఎల్ఎల్ / స్థితిస్థాపక ఎలుకల మధ్య రెండు లక్ష్యాలు గణనీయంగా భిన్నంగా ఉన్నాయి, ఇది ఎల్ఎల్ / స్థితిస్థాపక ఎలుకలలో పెరిగింది మరియు ఎస్ఎల్ / హాని కలిగించే ఎలుకలలో పెరిగిన విఇజిఎఫ్ కో-రిసెప్టర్ ఎన్ఆర్పి 2 . [61] మా miRNA విశ్లేషణ మరియు తదుపరి IPA మోడలింగ్ ఫలితాలతో కలిపి, ఈ డేటా VHPC లో పెరిగిన వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం ద్వారా బలహీనతను కలిగి ఉంటుందని గట్టిగా సూచిస్తుంది.

ప్రయోగం 3: SL / హాని ఎలుకలు VHPC లో రక్తనాళాల సాంద్రతను పెంచాయి

వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణాన్ని నేరుగా అంచనా వేయడానికి, మేము రక్తనాళాల సాంద్రత యొక్క మూడు స్వతంత్ర చర్యలను మరియు వాస్కులర్ పారగమ్యత యొక్క రెండు స్వతంత్ర చర్యలను పరిశీలించాము.

మొదట, మేము VWF యొక్క సాంద్రతను అంచనా వేసాము, ఇది రక్త నాళాలు మరియు వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణానికి బాగా ధృవీకరించబడిన మార్కర్. 62, 63, 64 ఎల్‌ఎల్ / స్థితిస్థాపక ఎలుకలకు (గణాంకాలు 2 ఎ మరియు బి) సంబంధించి ఎస్‌ఎల్ ఎలుకల విహెచ్‌పిసిలో విడబ్ల్యుఎఫ్-లేబుల్ చేయబడిన నాళాల సంఖ్య పెరిగింది మరియు నియంత్రణ మరియు ఎల్‌ఎల్ ఎలుకల మధ్య విడబ్ల్యుఎఫ్ మరక సమానంగా ఉంటుంది. సింగ్యులేట్ లేదా ప్రిలింబిక్ లేదా ఇన్ఫ్రాలింబిక్ ప్రిఫ్రంటల్ కార్టెక్స్ (సప్లిమెంటరీ ఫిగర్ 5) లో విడబ్ల్యుఎఫ్ మరకలో గణనీయమైన తేడాలు లేవు. రెండవది, మేము గ్లూకోజ్ ట్రాన్స్పోర్టర్ -1 యొక్క ప్రోటీన్ వ్యక్తీకరణను పరిశీలించాము (గ్లూటి 1; గణాంకాలు 2 సి మరియు డి). SL / హాని కలిగించే ఎలుకల యొక్క VHPC లో ఎండోథెలియల్ యొక్క వ్యక్తీకరణలో పెరుగుదల ఉంది, కాని SL / హాని కలిగించే ఎలుకలలో మెదడు రక్తనాళాల వ్యక్తీకరణలో నిర్దిష్ట పెరుగుదలను సూచిస్తుంది. మూడవది, FITC తో పెర్ఫ్యూజ్ చేయబడిన ఎలుకల ప్రత్యేక సమూహంలో, VHPC లోని FITC- లేబుల్ చేయబడిన నాళాల సంఖ్య మరియు ఓటమి లేటెన్సీల మధ్య బలమైన ప్రతికూల సహసంబంధం ( r = .50.54) ఉంది (గణాంకాలు 2e మరియు f). DHPC (Figure 2g) లో FITC- లేబుల్ చేయబడిన నాళాలు మరియు ఓటమి లేటెన్సీల మధ్య ముఖ్యమైన సంబంధం లేదు. సమిష్టిగా, ఈ డేటా SL / హాని ఎలుకలు VHPC లో రక్తనాళాల సాంద్రతను పెంచాయని చూపిస్తుంది.

Image

ఒత్తిడికి గురయ్యే ఎలుకలలో రక్తనాళాల సాంద్రత పెరుగుతుంది. ( ) విడబ్ల్యుఎఫ్ ఇమ్యునోహిస్టోకెమిస్ట్రీ యొక్క ప్రతినిధి చిత్రాలు. ( బి ) ఎల్‌ఎల్ / స్థితిస్థాపక ఎలుకలకు సంబంధించి ఎస్‌ఎల్ / హాని కలిగించే ఎలుకల విహెచ్‌పిసిలో విడబ్ల్యుఎఫ్ లేబులింగ్ పెంచబడింది (సమూహానికి n = 6–7; ఎఫ్ 2, 3 = 6.02, పి = 0.006). నియంత్రణలకు సంబంధించి SL / హాని లేదా LL / స్థితిస్థాపక ఎలుకలలో తేడా లేదు. ( సి ) ఎండోథెలియల్ గ్లూటి 1 యొక్క ప్రతినిధి వెస్ట్రన్ బ్లాట్ చిత్రాలు, ఇది ( డి ) ఎల్ఎల్ / స్థితిస్థాపక ఎలుకలకు సంబంధించి ఎస్ఎల్ / హాని కలిగించే ఎలుకల విహెచ్‌పిసిలో పెరిగింది (సమూహానికి n = 6-7; ఎఫ్ 2, 17 = 5.65, పి = 0.013 ); నియంత్రణ ఎలుకలకు సంబంధించి SL / హాని లేదా LL / స్థితిస్థాపక ఎలుకల మధ్య గ్లూటి 1 వ్యక్తీకరణలో తేడా లేదు. ఆస్ట్రోసైటిక్ గ్లూటి 1 మార్చబడలేదు. ( ) FITC- లేబుల్ చేయబడిన రక్త నాళాల యాభై మైక్రోమీటర్లు కన్ఫోకల్ z- స్టాక్స్. ( ఎఫ్ ) సామాజిక ఓటమికి జాప్యం మరియు VHPC ( n = 15, r = .50.54, P = 0.03) లోని FITC- లేబుల్ చేయబడిన ఓడల సగటు సంఖ్య మధ్య ప్రతికూల సంబంధం ఉంది. ( జి ) సామాజిక ఓటమికి జాప్యం మరియు dHPC ( n = 15) లోని సగటు FITC- లేబుల్ నాళాల మధ్య ముఖ్యమైన సంబంధం లేదు. డేటా సగటు + సెమ్ * పి <0.05 ను సూచిస్తుంది. FITC, ఫ్లోరోసెసిన్ ఐసోథియోసైనేట్; LL, దీర్ఘ జాప్యం; SL, చిన్న జాప్యం; vHPC, వెంట్రల్ హిప్పోకాంపస్; VWF, వాన్ విల్లేబ్రాండ్ ఫాక్టర్.

పూర్తి పరిమాణ చిత్రం

ప్రయోగం 4: హాని కలిగించే ఎలుకల vHPC లో మంట యొక్క గుర్తులు పెరిగాయి

వయోజన మెదడులో వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణాన్ని ప్రేరేపించడానికి మంట కీలకం కాబట్టి హాని కలిగించే ఎలుకల vHPC లో పెరిగిన రక్తనాళాల సాంద్రత మంట ఫలితంగా ఉంటుంది. మేము VHPC మరియు dHPC, BBB పారగమ్యతలో మైక్రోగ్లియల్ కార్యాచరణను అంచనా వేసాము, ఇవి మంట సమయంలో నియంత్రించబడిన ప్రక్రియలు. 36, 46, 47 ఎస్ఎల్ / హాని కలిగించే ఎలుకల (గణాంకాలు 3 ఎ మరియు బి) యొక్క విహెచ్‌పిసిలో ఇబా 1-ఇమ్యునో పాజిటివ్ మైక్రోగ్లియా సంఖ్య పెరిగినట్లు మేము కనుగొన్నాము, కాని డిహెచ్‌పిసిలో కాదు (మూర్తి 3 సి). హిప్పోకాంపస్ యొక్క రెండు ప్రాంతాలలో నియంత్రణ మరియు ఎల్ఎల్ ఎలుకల మధ్య ఇబా 1 వ్యక్తీకరణలో తేడా లేదు.

Image

హాని కలిగించే ఎలుకల vHPC లో తాపజనక మరియు నాడీ కార్యకలాపాల పెరుగుదల. ( ) బార్ గ్రాఫ్స్‌లో విశ్లేషించిన ప్రాంతాలను చూపించే ఇబా 1 కోసం ప్రతినిధి ఇమ్యునోహిస్టోకెమిస్ట్రీ చిత్రాలు. ( బి ) నియంత్రణ మరియు ఎల్ఎల్ / స్థితిస్థాపక ఎలుకలకు సంబంధించి ఎస్ఎల్ / హాని కలిగించే ఎలుకల విహెచ్‌పిసిలో ఇబా 1 వ్యక్తీకరణ పెరిగింది ( ఎన్ = 7; ఎఫ్ 2, 19 = 20.78, పి <0.0001). ( సి ) ఏదైనా సమూహాల మధ్య డోర్సల్ హిప్పోకాంపస్‌లో ఇబా 1 యొక్క వ్యక్తీకరణలో తేడా లేదు (సమూహానికి n = 8). ( డి ) ఎఫ్‌ఐటిసి విపరీత కొలత, నియంత్రణ మరియు ఎల్‌ఎల్ / స్థితిస్థాపక ఎలుకలకు సంబంధించి ఎస్‌ఎల్ / హాని కలిగించే ఎలుకలలోని రక్త నాళాల నుండి ఎఫ్ఐటిసి గణనీయంగా 7 μm వరకు పెరిగినట్లు చూపించింది (సమూహం యొక్క ప్రధాన ప్రభావం, ఎఫ్ 2, 112 = 25.83, పి = 0.0001; మరియు ప్రధానమైనది. దూరం ప్రభావం, F 6, 112 = 4.35, పి = 0.001). ( ) dHPC లో ఏ సమూహాల మధ్య సమూహం యొక్క ముఖ్యమైన ప్రధాన ప్రభావం లేదు, కాని దూరం యొక్క ముఖ్యమైన ప్రధాన ప్రభావం ఉంది (F 6, 119 = 10.76, P = 0.0001). ( ఎఫ్ ) ప్లాస్మా ఎస్ 100β ఓటమి లేటెన్సీలతో ప్రతికూలంగా సంబంధం కలిగి ఉంది ( n = 11, r = .0.75, పి = 0.0009). ( g మరియు h ) నియంత్రణ ( n = 8) మరియు స్థితిస్థాపక LL ఎలుకలు ( n = 5; F) కు సంబంధించి SL / హాని కలిగించే ఎలుకల ( n = 5) యొక్క VHPC CA1 ప్రాంతంలో దీర్ఘకాలిక న్యూరోనల్ కార్యాచరణ మార్కర్ FosB / osFosB ని పెంచారు. 2, 15 = 18.16, పి <0.0001). ( i ) vHPC CA3 ప్రాంతంలో FosB / osFosB వ్యక్తీకరణలో తేడా లేదు. ( j మరియు k ) dHPC ( P ) యొక్క CA1 (సమూహానికి n = 8) లేదా CA3 ప్రాంతం (నియంత్రణ n = 7, SL n = 8, LL n = 8) లోని సమూహాల మధ్య FosB / osFosB వ్యక్తీకరణలో తేడా లేదు. > 0.05). 'A' అనే అక్షరం దూరం యొక్క గణనీయమైన ప్రభావాన్ని సూచిస్తుంది మరియు 'b' ఇతర సమూహాల కంటే SL / హాని కలిగించే అధిక సమూహ ప్రభావాన్ని సూచిస్తుంది. డేటా సగటు + సెమ్ * పి <0.05 ను సూచిస్తుంది. dHPC, డోర్సల్ హిప్పోకాంపస్; FITC, ఫ్లోరోసెసిన్ ఐసోథియోసైనేట్; LL, దీర్ఘ జాప్యం; SL, చిన్న జాప్యం; vHPC, వెంట్రల్ హిప్పోకాంపస్.

పూర్తి పరిమాణ చిత్రం

హిప్పోకాంపస్‌లో ప్రత్యేకంగా BBB పారగమ్యతను అంచనా వేయడానికి, FITC తో ఇంట్రాకార్డియాక్ పెర్ఫ్యూజన్ తర్వాత మేము VHPC మరియు dHPC లలో FITC ఎక్స్‌ట్రావేషన్‌ను కొలిచాము (ప్రయోగం 3 లో ఉన్న ఎలుకల సమన్వయం). SL / హాని ఎలుకలు నియంత్రణ మరియు LL ఎలుకలకు సంబంధించి VHPC లోని నాళాల నుండి 1–7 μm దూరంలో FITC విపరీతతను పెంచాయి, ఇది BBB పారగమ్యతను పెంచింది (మూర్తి 3d). DHPC FITC ఎక్స్‌ట్రావాసేషన్ (మూర్తి 3 ఇ) లోని సమూహాల మధ్య తేడా లేదు. ఓటమి జాప్యం మరియు ప్లాస్మా S100β ఏకాగ్రత (మూర్తి 3 ఎఫ్) మధ్య బలమైన ప్రతికూల ( r = .0.75) ఉంది, ఇది SL / హాని కలిగించే ఎలుకలు BBB పారగమ్యతను పెంచాయని సూచిస్తున్నాయి. కలిసి చూస్తే, SL / హాని కలిగించే ఎలుకలలో గమనించిన మైక్రోగ్లియా మరియు పెరిగిన BBB పారగమ్యత, దీర్ఘకాలిక ఒత్తిడికి గురయ్యే అవకాశం VHPC లో పెరిగిన తాపజనక ప్రక్రియల ద్వారా వర్గీకరించబడుతుందని సూచిస్తుంది.

ప్రయోగం 5: సామాజిక ఓటమి తరువాత SL / హాని ఎలుకలు vHPC లో న్యూరోనల్ యాక్టివేషన్ పెంచాయి

నాడీ కార్యకలాపాలలో దీర్ఘకాలిక మార్పులకు (న్యూరాన్లు లేదా ఆస్ట్రోసైట్స్ విడుదల చేసిన తాపజనక మధ్యవర్తుల ద్వారా) మరియు మంట, 17, 24, 46, 66, 67, 68, 69 లకు రక్తనాళాల సాంద్రత పెరుగుతుంది కాబట్టి , SL / హాని కలిగించే ఎలుకలు ఉన్నాయని మేము icted హించాము vHPC లో దీర్ఘకాలిక న్యూరల్ యాక్టివిటీ మార్కర్ FosB / osFosB యొక్క పెరిగిన వ్యక్తీకరణ. 49, 70 నియంత్రణ లేదా ఎల్ఎల్ ఎలుకలకు సంబంధించి విహెచ్‌పిసి యొక్క CA1 ప్రాంతంలో (అనగా, కీలకమైన ఉత్పాదక ప్రాంతం) SL / హాని ఎలుకలు గణనీయంగా FosB / osFosB వ్యక్తీకరణను పెంచాయి (గణాంకాలు 3g మరియు i). VHPC (Figure 3i) యొక్క CA3 లో లేదా DHPC యొక్క CA1 లేదా CA3 ప్రాంతంలో (వరుసగా గణాంకాలు 3j మరియు k) FosB / osFosB వ్యక్తీకరణలో తేడా లేదు. సామాజిక ఓటమి యొక్క ప్రభావాలు ఒత్తిడితో సంబంధం ఉన్న ఇతర మెదడు ప్రాంతాలలో ఉన్నాయో లేదో అంచనా వేయడానికి, మేము బాసోలెటరల్ అమిగ్డాలా మరియు వెంట్రోమీడియల్ ప్రిఫ్రంటల్ కార్టెక్స్ (సప్లిమెంటరీ మూర్తి 6) లో FosB / osFosB ని అంచనా వేసాము మరియు FosB / osFosB వ్యక్తీకరణలోని సమూహాల మధ్య తేడాలు కనుగొనబడలేదు.

ప్రయోగం 6: ప్రో-ఇన్ఫ్లమేటరీ సైటోకిన్ VEGF164 డెలివరీ ఒత్తిడి దుర్బలత్వాన్ని ప్రోత్సహిస్తుంది

పైన పేర్కొన్న ఫలితాలు శోథ ప్రక్రియలు, నాడీ కార్యకలాపాలు మరియు వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం ప్రత్యేకంగా VHPC లో స్థితిస్థాపక ఎలుకలతో పోలిస్తే బలహీనంగా ఉన్నాయని సూచిస్తున్నాయి. ప్రో-ఇన్ఫ్లమేటరీ సైటోకిన్ VEGF164 (మూర్తి 4a లోని ప్రయోగాత్మక రూపకల్పన) యొక్క పరిపాలనను ఉపయోగించి c షధశాస్త్రపరంగా వాటిని ప్రేరేపించడం ద్వారా ఈ పెరుగుదలలు నేరుగా హానిని కలిగిస్తాయా అని మేము తరువాత అడిగాము. రోజువారీ పూర్వ-ఓటమి VEGF164 చికిత్స 4 వ రోజు (మూర్తి 4 బి) లో ఓటమి లేటెన్సీలను తగ్గించింది మరియు వాహన-చికిత్స నియంత్రణలకు (మూర్తి 4 సి) సంబంధించి సామాజిక సంకర్షణ పరీక్షలో ఆందోళన-లాంటి ప్రవర్తన పెరిగింది. ఇంకా, VEGF164- చికిత్స చేయబడిన ఎలుకలలో VHPC (గణాంకాలు 4d మరియు e) లో పెరిగిన సంఖ్యలో VWF- పాజిటివ్ నాళాలు ఉన్నాయి, పెరిగిన మైక్రోగ్లియా సంఖ్య (మూర్తి 4f) మరియు VHPC (Figure 4g) లో పెరిగిన FosB / osFosB వ్యక్తీకరణ, ఎలుకలతో పోలిస్తే వాహనంతో చికిత్స. VEGF164 యొక్క ఈ ప్రభావాలు గణనీయమైన drug షధ ప్రభావాలు, ఓడిపోయిన మరియు ఓడిపోని ఎలుకలలో VEGF164 యొక్క గణనీయమైన ప్రభావాన్ని సూచిస్తాయి; అయినప్పటికీ, ఓడిపోయిన ఎలుకలలో ప్రభావాలు పెద్దవి. సాంఘిక ఓటమి సమయంలో మరియు తరువాత హాని కలిగించే SL- లాంటి ప్రవర్తనలను ఉత్పత్తి చేయడానికి VHPC లో వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం మరియు న్యూరానల్ కార్యకలాపాలతో పాటుగా మంటను ప్రేరేపించడం సరిపోతుందని ఈ డేటా సూచిస్తుంది. పరిపాలన యొక్క అనువైన పరిధీయ మార్గం ద్వారా శోథ నిరోధక drug షధాన్ని పంపిణీ చేయడం వలన VHPC లోని తాపజనక ప్రక్రియలను తగ్గిస్తుందా మరియు ఒత్తిడికి గురయ్యే అవకాశం తగ్గుతుందా అని మేము తరువాత అడిగాము.

Image

VHPC లో మంట యొక్క ప్రేరణ ఒత్తిడి దుర్బలత్వాన్ని ప్రోత్సహిస్తుంది. ( ) ప్రయోగాత్మక డిజైన్ లేఅవుట్. ( బి ) VEGF164 తో చికిత్స పొందిన ఎలుకలు 4 వ రోజు ఓటమి జాప్యాన్ని తగ్గించాయి (నియంత్రణ n = 12; VEGF164 n = 14; t 24 = 2.66, P = 0.01). ( సి ) సామాజిక సంకర్షణ ప్రవర్తనను తగ్గించడంలో VEGF యొక్క ముఖ్యమైన ప్రధాన ప్రభావం ఉంది (సమూహానికి n = 7–8). కింది చర్యల కోసం మెదడు యొక్క ఉపసమితులను పరిశీలించారు. ( డి ) VHPC యొక్క CA1 ప్రాంతంలో రక్తనాళాల సాంద్రతను పెంచడం ద్వారా treatment షధ చికిత్స ( F 1, 13 = 9.4, P = 0.009) మరియు సామాజిక ఓటమి ( F 1, 13 = 21.49, P = 0.005) యొక్క ప్రధాన ప్రభావం ఉంది. VEGF164 తో (సమూహానికి n = 4–5) VWF అంచనా వేసినట్లుగా సాంద్రతను గణనీయంగా పెంచుతుంది మరియు ఓడిపోయిన జంతువులను ఓడించని ఎలుకల కంటే ఎక్కువ VWF వ్యక్తీకరణ కలిగి ఉంటుంది. ( ) VHPC యొక్క CA3 ప్రాంతంలో VWF వ్యక్తీకరణపై treatment షధ చికిత్స యొక్క ప్రధాన ప్రభావం ఉంది (సమూహానికి n = 4–5; F 1, 13 = 17.2, P = 0.001) VEGF164- చికిత్స చేసిన ఎలుకలతో పెరిగిన సాంద్రతలను ప్రదర్శిస్తుంది. ( ఎఫ్ ) వెంట్రల్ హిప్పోకాంపస్‌లో ఇబా 1 వ్యక్తీకరణపై VEGF164 చికిత్స ( F 1, 10 = 15.01, P = 0.003) మరియు సామాజిక ఓటమి ( F 1, 10 = 6.14, P = 0.03) యొక్క ప్రధాన ప్రభావం ఉంది. VEGF- చికిత్స చేసిన ఎలుకలు మరియు ఓడిపోయిన ఎలుకలలో. ( g ) VHPC యొక్క CA1 ప్రాంతంలో నాడీ కార్యకలాపాలపై (FosB / osFosB ఇమ్యునో పాజిటివ్ కణాలను లెక్కించడం ద్వారా అంచనా వేయబడింది) VEGF164 చికిత్స యొక్క ప్రధాన ప్రభావం ఉంది (సమూహానికి b: n = 3–4, F 1, 11 = 8.72, పి = 0.01). CA1 ప్రాంతంలో నాడీ కార్యకలాపాలపై ఓటమి యొక్క ప్రధాన ప్రభావం కూడా ఉంది, ఓడిపోయిన ఎలుకలతో ఓడిపోయిన ఎలుకల కంటే ఎక్కువ నాడీ కార్యకలాపాలను ప్రదర్శిస్తుంది ( F 1, 11 = 19.52, P = 0.001). డేటా సగటు ± sem ను సూచిస్తుంది మరియు అక్షరాలు వ్యత్యాసం యొక్క రెండు-మార్గం విశ్లేషణలో గణాంక ప్రాముఖ్యతను సూచిస్తాయి (ANOVA; P <0.05). 'A' అనే అక్షరం ఓటమి యొక్క ప్రధాన ప్రభావాన్ని సూచిస్తుంది మరియు 'b' అక్షరం drug షధ చికిత్స యొక్క ప్రధాన ప్రభావాన్ని సూచిస్తుంది. * పి <0.05. vHPC, వెంట్రల్ హిప్పోకాంపస్; VWF, వాన్ విల్లేబ్రాండ్ ఫాక్టర్.

పూర్తి పరిమాణ చిత్రం

ప్రయోగం 7: శోథ నిరోధక of షధం యొక్క పరిధీయ పరిపాలన vHPC లో తాపజనక ప్రక్రియలను తగ్గిస్తుంది మరియు ఒత్తిడి దుర్బలత్వాన్ని తగ్గిస్తుంది

ఈ ప్రయోగంలో, ఈ ఎలుకలలో మంటను తగ్గించడం వల్ల వాటి హాని తగ్గుతుందనే othes హను నేరుగా పరీక్షించడానికి మేము SL / హాని ఎలుకలపై దృష్టి పెట్టాము. 4 రోజుల సామాజిక ఓటమి తరువాత, 'మెటీరియల్స్ అండ్ మెథడ్స్' విభాగంలో వివరించిన విధంగా క్లస్టర్ విశ్లేషణ ద్వారా SL / హాని ఎలుకలను గుర్తించారు. గుర్తించిన తర్వాత, ఈ 3 రోజులలో ప్రతి ఒక్కటి మెలోక్సికామ్ లేదా వాహనంతో ముందస్తు చికిత్సతో SL / హాని ఎలుకలు మరో మూడు రోజుల సామాజిక ఓటమికి గురయ్యాయి (మూర్తి 5a లో చిత్రీకరించిన ప్రయోగాత్మక డిజైన్). ఈ రూపకల్పన ఎన్నుకోబడింది ఎందుకంటే మొదట సామాజిక ఓటమి లేకుండా, తాపజనక ప్రక్రియలు జరిగే అవకాశం లేదు, దీనిలో శోథ నిరోధక మందు దుర్బలత్వాన్ని తిప్పికొట్టడానికి పనిచేస్తుంది. మెలోక్సికామ్ ఎన్నుకోబడింది ఎందుకంటే ఇది హిప్పోకాంపల్ ఇన్ఫ్లమేటరీ మార్కర్లను తగ్గిస్తుందని గతంలో చూపబడింది. [57] మెలోక్సికామ్-చికిత్స చేయబడిన ఎలుకలు పెరిగిన సామాజిక సంకర్షణ సమయాన్ని (మూర్తి 5 బి) ప్రదర్శించాయి మరియు ఈ యాంజియోలైటిక్-రకం ప్రభావాలతో పాటు రక్తనాళాల సాంద్రత (మూర్తి 5 సి) మరియు వాహనంతో చికిత్స పొందిన ఓడిపోయిన ఎలుకలకు సంబంధించి మైక్రోగ్లియా సంఖ్య (మూర్తి 5 డి) తగ్గుతుంది. ఒత్తిడి సమయంలో మంటను నిరోధించడం వలన ఆందోళన-వంటి ప్రవర్తనలు తగ్గడం మరియు ఒత్తిడి-ప్రేరిత వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం మరియు VHPC లో మైక్రోగ్లియా సాంద్రత తగ్గడం వంటి మరింత స్థితిస్థాపక సమలక్షణాన్ని ప్రోత్సహిస్తుందని ఈ డేటా సూచిస్తుంది.

Image

VHPC లో మంట యొక్క నిరోధం SL ఎలుకలలో బలహీనత యొక్క సూచికలను తగ్గించింది. ( ) ప్రయోగాత్మక డిజైన్ లేఅవుట్. ( బి ) వాహనంతో పోలిస్తే సామాజిక పరస్పర చర్యలో గడిపిన సమయం మెలోక్సికామ్ తగ్గింది (సమూహానికి n = 5, టి 8 = 2.5, పి = 0.04), ( సి ) తగ్గించిన విడబ్ల్యుఎఫ్ మరక (నియంత్రణ n = 4, మెలోక్సికామ్ ఎన్ = 5, టి 7 = SL ఎలుకల వాహన చికిత్సతో పోలిస్తే 2.39, P = 0.05) ( d ) మరియు తగ్గిన Iba1 రంజనం (సమూహానికి n = 4, t 6 = 2.79, P = 0.03). ( ) ఒత్తిడి సమయంలో VHPC లో వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణాన్ని ప్రోత్సహించే నాడీ కార్యకలాపాలు మరియు మంట యొక్క సంభావ్య యంత్రాంగాన్ని ప్రదర్శించే మోడల్ మరియు ఈ ప్రక్రియల యొక్క పరస్పర చర్య ఒత్తిడి సమయంలో దుర్బలత్వానికి దారితీస్తుంది (ఓడిపోవటానికి తక్కువ జాప్యం సూచించినట్లుగా నిష్క్రియాత్మక కోపింగ్) మరియు ఆందోళన-సంబంధిత ప్రవర్తనలు పెరిగిన తరువాత ఒత్తిడి. డేటా సగటు ± sem * P <0.05 ను సూచిస్తుంది. SL, చిన్న జాప్యం; vHPC, వెంట్రల్ హిప్పోకాంపస్; VWF, వాన్ విల్లేబ్రాండ్ ఫాక్టర్.

పూర్తి పరిమాణ చిత్రం

చర్చా

అర్రే విశ్లేషణలు ఒత్తిడి దుర్బలత్వం యొక్క సంభావ్య మధ్యవర్తిగా వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణాన్ని వెల్లడించాయి

VHPC లోని మైక్రోఆర్ఎన్ఏలను అంచనా వేసే నిష్పాక్షికమైన విధానం సామాజిక ఓటమికి గురయ్యే నవల లక్ష్య జన్యువులను మరియు క్రియాత్మక మార్గాలను గుర్తించడానికి ఉపయోగించబడింది. VHPC లో miR-30e-3p యొక్క వ్యక్తీకరణ స్థితిస్థాపక జంతువులలో తగ్గించబడింది మరియు స్థితిస్థాపక జంతువులతో పోలిస్తే హాని కలిగించే జంతువులలో miR-455-3p తగ్గించబడింది. ప్రస్తుత అధ్యయనంలో విస్తృత miRNA- ఆధారిత విశ్లేషణను ఉపయోగించడం యొక్క ప్రధాన లక్ష్యం, ఒత్తిడికి అవకలన ప్రతిస్పందనలలో పాల్గొనగల నవల మార్గాలను గుర్తించడం. ఈ మిఆర్ఎన్ఎ పరిశోధనలు మరియు తరువాతి మార్గ విశ్లేషణలు ఈ మైక్రోఆర్ఎన్ఏలచే లక్ష్యంగా ఉన్న జన్యువులు ఎస్ఎల్ / హాని కలిగించే ఎలుకలలో వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం మరియు మంటతో సంబంధం కలిగి ఉన్నాయని సూచించాయి. మరింత విశ్లేషణ ప్రకారం, వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణంతో సంబంధం ఉన్న అనేక జన్యువులు (అనగా , Cxcl1 , Mapk14 , Nrp2 , Pdgfa , Pecam1 , Hgf ) హాని కలిగించే ఎలుకల vHPC లో పెరిగాయి, మరియు LL ఎలుకలలో రెండు RNA లు ( టిమ్ప్ 2 మరియు టింప్ 3 ) యాంజియోజెనిసిస్ యొక్క అణచివేతలు . 58, 59, 60 యాంజియోజెనిసిస్ శ్రేణిలో గుర్తించబడిన అనేక లక్ష్యాలు కూడా మంటలో పాల్గొంటాయి, ఇది పెద్దవారి మెదడులో వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం తాపజనక మధ్యవర్తులపై ఆధారపడి ఉంటుంది కాబట్టి ఇది ఆశ్చర్యం కలిగించదు. 17, 18 ఉదాహరణకు, Cxcl1 , PDGF-A మరియు HGF శక్తివంతమైన శోథ నిరోధక అణువులను ఎన్కోడ్ చేస్తాయి. 71, 72, 73 Mapk14 ఎన్కోడ్ p38α మైటోజెన్-యాక్టివేటెడ్ ప్రోటీన్ కినేస్, ఇది ట్యూమర్ నెక్రోసిస్ ఫ్యాక్టర్- as వంటి ప్రో-ఇన్ఫ్లమేటరీ సైటోకిన్ విడుదలను ప్రేరేపించడానికి బాధ్యత వహిస్తుంది. 74, 75 SL / హాని కలిగించే ఎలుకలలో ఈ లక్ష్యాల యొక్క నిర్దిష్ట పాత్రను పరిశీలిస్తున్న భవిష్యత్ అధ్యయనాలు ఒత్తిడి దుర్బలత్వంలో మంట మరియు వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం యొక్క పాత్రపై విలువైన అంతర్దృష్టిని వెల్లడిస్తాయి.

సమిష్టిగా, ఈ డేటా VHPC లో తాపజనక ప్రక్రియలు మరియు వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం సూచించింది, ఇది వయోజన మెదడులో మంటపై ఆధారపడి ఉంటుంది, 46, 66 ఒత్తిడికి గురయ్యే అవకాశం ఉంది. ఈ డేటా ఆధారంగా, ఒత్తిడి దుర్బలత్వం వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం మరియు vHPC లో తాపజనక ప్రక్రియల క్రియాశీలత ద్వారా వర్గీకరించబడుతుందని మేము hyp హించాము.

ఒత్తిడి హాని కలిగించే ఎలుకల vHPC లో పెరిగిన వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం మరియు తాపజనక ప్రక్రియల గుర్తింపు

మేము మూడు చర్యల ద్వారా vHPC లో వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణాన్ని అంచనా వేసాము, ఇవన్నీ SL లో రక్త నాళాల సాంద్రత / LL / స్థితిస్థాపక ఎలుకలతో పోలిస్తే హానిని సూచిస్తున్నాయి. ప్రత్యేకించి, FITC యొక్క ఇంట్రాకార్డియాక్ పెర్ఫ్యూజన్ తర్వాత రక్త నాళాల సాంద్రత మరియు ఎండోథెలియల్ మార్కర్ VWF తో తడిసిన రక్త నాళాల సాంద్రతలు LL / స్థితిస్థాపక ఎలుకలతో పోలిస్తే SL / హానిలో పెరిగాయి. గ్లూకోజ్ తీసుకునే సైట్‌లను లక్ష్యంగా చేసుకునే రక్త నాళాల యొక్క మరొక మార్కర్ ఎండోథెలియల్ గ్లూటి 1 యొక్క వ్యక్తీకరణను మేము గమనించాము. గ్లూకోజ్ ట్రాన్స్పోర్టర్ యొక్క పెరిగిన వ్యక్తీకరణ రక్త నాళాలకు ప్రత్యేకమైనది, ఎందుకంటే ఆస్ట్రోసైట్-నిర్దిష్ట గ్లూకోజ్ ట్రాన్స్పోర్టర్ యొక్క వ్యక్తీకరణ ఒత్తిడి ద్వారా మార్చబడలేదు. ఈ అధ్యయనంలో మేము ఆంజియోజెనెసిస్‌ను నేరుగా అంచనా వేయలేదని గమనించడం ముఖ్యం, అయితే, పెరిగిన రక్తనాళాల సాంద్రత మరియు BBB అవరోధ పారగమ్యత అంచనా వేయబడ్డాయి, ఇది వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం వాస్తవానికి SL / హాని ఎలుకలలో సంభవించిందని గట్టిగా సూచిస్తుంది, క్రింద లోతుగా చర్చించినట్లు. 65, 76, 77 కలిసి, రక్తనాళాల సాంద్రత పెరిగే విధంగా VHPC లో వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం ద్వారా ఒత్తిడికి గురయ్యే అవకాశం ఉందని ఈ ఫలితాలు చూపిస్తున్నాయి. దీని యొక్క ఒక పరిణామం ఏమిటంటే, SL / హాని కలిగించే ఎలుకలలో పెరిగిన గ్లూటి 1 వ్యక్తీకరణ ద్వారా VHPC కి గ్లూకోజ్ లభ్యత పెరిగే అవకాశం ఉంది, ఇది పెరిగిన నాడీ కార్యకలాపాల తరువాత జీవక్రియ మద్దతును అందిస్తుంది (క్రింద చూడండి). 78

ఒత్తిడి-సంబంధిత రుగ్మతలకు ప్రతిస్పందనగా మెదడులో మోర్ఫోమెట్రిక్ మరియు వాల్యూమెట్రిక్ మార్పులు సంభవిస్తాయని మునుపటి పరిశోధనలు నిరూపించాయి, బాసోలెటరల్ అమిగ్డాలా 79 యొక్క పరిమాణం పెరగడం మరియు హిప్పోకాంపల్ వాల్యూమ్ 80, 81 తగ్గడం వంటివి న్యూరోనల్ మరియు గ్లియల్ డెన్సిటీలో మార్పుల ద్వారా అంచనా వేయబడ్డాయి. [82] అయినప్పటికీ, రక్త నాళాలలో మోర్ఫోమెట్రిక్ మార్పులు కూడా జరుగుతాయా అనే దానిపై ఎటువంటి దర్యాప్తు జరగలేదు.

వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణం సమయంలో, వాస్కులర్ పునర్నిర్మాణానికి కీలకమైన తాపజనక అణువుల కారణంగా BBB పారగమ్యత పెరుగుతుంది. 17, 46, 66 ఈ అధ్యయనంలో, బలహీనమైన ఎలుకల vHPC లో పెరిగిన FITC విపరీతతను మేము గమనించాము, రక్త నాళాల నుండి ఎక్కువ దూరం వద్ద FITC వ్యాప్తి ఉండటం ద్వారా సూచించబడింది, SL / హాని కలిగించే ఎలుకలలో BBB యొక్క పారగమ్యతను సూచిస్తుంది. This was confirmed by the finding of increased plasma concentrations of S100β, a soluble astrocytic protein increased in plasma following BBB permeability, and is a well-validated marker of BBB permeability. 42, 43, 44, 45 Increased plasma S100β is a clinically relevant finding as it may suggest this measure could be novel biomarker to assess vulnerability in response to traumatic events. Finally, increased number of microglia in the vHPC was observed in vulnerable rats. This suggests increased inflammation in these rats as Iba1 expression is increased in microglia following inflammation and the number of Iba1-immunopositive cells increases following inflammation. 35, 36, 37, 38, 39, 40 Upregulation in microglia activity and expression can lead to increased production and release of pro-inflammatory cytokines 46, 66, 83 from microglia, which promotes endothelial cell proliferation. 84, 85 Iba1 is constitutively expressed in the microglia, 86 however increased number of Iba1-positive microglial has been observed in brain regions following trauma, likely as both a response to inflammation, but also as a triggering event in inflammation via the release of cytokines from active Iba1-positive microglia. 35, 36, 37, 38, 39, 40 This increase in microglia has been associated with an increase in microglial proliferation and recruitment towards areas of inflammation. 37 In some studies, an increase in Iba1-positive expression did not change following inflammation, while a change in microglia morphology from resting to active states has been observed, 87 thus there is some controversy as to whether Iba1 expression accurately reflects microglial activation. The LL/resilient rats were protected against the vascular remodeling and inflammatory events observed in vulnerable rats because the vascular markers examined in LL/resilient rats were not different from control rats. This is an important distinction: we propose that resiliency is a robust protection against the effects of stress and hence resilient rats are likely similar to controls. Together, the results suggest that inflammatory processes and vascular remodeling in the vHPC characterize vulnerability to chronic stress.

Vascular remodeling in the vHPC likely has a functional relationship with neural activity and together, neurons, microglia and blood vessels constitute the basic functional unit in the brain known as the 'neurovascular unit'. 88 We observed increases in neural activity as assessed by an increase in the number of FosB/ΔFosB cells in the vHPC in vulnerable rats. The vascular, inflammatory and neural components can influence each other's activity. For example, many inflammatory cytokines, released during stress can affect neural activity, as well as trigger vascular remodeling. 1, 3, 26, 30, 46, 89, 90, 91 Conversely, neural activity can promote alterations in the vascular system by releasing pro-inflammatory cytokines, which may effectively remodel the vasculature to support neural activity. 24, 26, 92 Thus, greater neural activity may be triggering microglial activity and vascular remodeling with daily stress in SL/vulnerable rats, which could produce increased anxiety-like behavior in SL/vulnerable rats, consistent with the known role of the vHPC in mediating anxiety-like behaviors 13, 93 (See Figure 5e).

Increased inflammatory processes and vascular remodeling in the vHPC of rats vulnerable to chronic stress is critical for stress vulnerability

To test the hypothesis that vascular remodeling and inflammatory processes in the vHPC are critical in promoting stress vulnerability, we used pharmacological approaches to reduce or elevate inflammatory processes and examine resultant effects on behavior. The pro-inflammatory cytokine VEGF164 was sufficient to induce many of the inflammatory effects found in the vHPC of SL/vulnerable rats, including increased Iba1 expression, increased blood vessel densities and increased neural activation in the vHPC. Importantly, VEGF was also sufficient to induce decreases in latency to be defeated and increases in anxiety-like behaviors in the social interaction test, characteristic of SL/vulnerable rats. 10 These data mirror previous observations that VEGF effects have been linked to mood disorders in several other studies. 89, 94, 95

Previous research has shown that VEGF can induce neuroinflammation, and VEGF is considered to be one of the major initiators of inflammation, BBB permeability and vascular remodeling in the adult brain. 17, 66, 96, 97, 98 Typically, the pro-inflammatory effects of VEGF precede its effects on vascular remodeling. 17 Thus, we propose that increasing VEGF in the vHPC during repeated defeat promoted inflammatory processes and subsequently restructured the cerebral vasculature to allow increased neural activity by increasing delivery of nutrients necessary to sustain neural activity in response to stress. These effects of VEGF also occurred in non-defeated rats suggesting that VEGF treatment was sufficient to produce a vulnerable state even in the absence of stress. Our data might also explain the positive effects of VEGF in the dorsal hippocampus in other studies 20, 99 in that increasing vascular remodeling in the dorsal hippocampus, a region with functions distinct from those of the vHPC, could promote neural activity and thus attenuate depression-like behaviors in rodents. The finding that vascular remodeling was necessary for VEGFs effects also fits the timeline in which effects of VEGF were observed, whereby it took 4 days for a significant effect of VEGF treatment to emerge. Thus, VEGFs effects were unlikely to be via an immediate effect such as direct modulation of neural activity or acute induction of inflammation.

To test whether the converse, a decrease in inflammatory processes, could reduce vulnerability, we treated rats already identified as vulnerable with meloxicam. Meloxicam treatment both promoted behavioral resiliency in SL/vulnerable rats by increasing social interactions, and prevented the increase in microglia observed in vehicle-treated rats (suggesting decreased inflammation) and vascular remodeling in SL/vulnerable rats. The effects of meloxicam were modest, likely because meloxicam was peripherally administered, so its anti-inflammatory effects at the vHPC may have been reduced. Future studies aimed at directly reducing inflammatory roles in the vHPC may offer greater insight into the direct role of the vHPC in mediating individual differences in response to stress. Nonetheless, it is intriguing that administrating an anti-inflammatory drug peripherally can have significant effects on reducing stress vulnerability. It is unclear whether the inflammatory effects observed in SL/vulnerable rats are generated in the central nervous system or periphery, and it is possible that many of the inflammatory actions observed in the brain from SL/vulnerable rats originates from peripheral cues, such as peripherally released cytokines or immune cells. In summary, the results with VEGF and meloxicam together suggest that inflammatory processes and blood vessel remodeling in the vHPC are critical substrates underlying the emergence of vulnerability in stressed animals. In particular, the results with meloxicam suggest that anti-inflammatory drugs or treatments that block vascular remodeling during stress may prevent or reverse the adverse impact of stress in vulnerable individuals.

తీర్మానాలు మరియు భవిష్యత్తు దిశలు

In this study, we identify the vHPC as a novel brain region important in regulating vulnerability to chronic social defeat. The effects observed here were specific to the vHPC, rather than the dHPC or medial prefrontal cortex. Although the vHPC is known to have a role in mediating anxiety-like behavior, 13, 93 this, to the best of our knowledge, is the first demonstration that the vHPC is important for mediating individual differences in response to chronic stress that lead to a vulnerable phenotype. We suggest the anxiety-like behaviors in vulnerable rats derive from increased neural activity in the vHPC and vascular remodeling likely induced by inflammatory mediators that sustain the neural activity. Further studies are required to definitively determine the temporal sequence of these events. These data demonstrate the importance of inflammatory processes and blood vessel remodeling in the vHPC for the development of vulnerability to stress. Further, these results suggest that dampening inflammatory processes by administering anti-inflammatory agents reduces vulnerability to stress. These results have translational relevance as they suggest that administration of anti-inflammatory agents may reduce the impact of stress or trauma in vulnerable individuals.

అనుబంధ సమాచారం

పద పత్రాలు

  1. 1.

    అనుబంధ మూర్తి లెజెండ్స్

  2. 2.

    అనుబంధ టేబుల్ లెజెండ్స్

చిత్ర ఫైళ్లు

  1. 1.

    అనుబంధ మూర్తి 1

  2. 2.

    అనుబంధ మూర్తి 2

  3. 3.

    అనుబంధ మూర్తి 3

  4. 4.

    అనుబంధ మూర్తి 4

  5. 5.

    అనుబంధ మూర్తి 5

  6. 6.

    అనుబంధ మూర్తి 6

ఎక్సెల్ ఫైల్స్

  1. 1.

    అనుబంధ పట్టిక 1

  2. 2.

    అనుబంధ పట్టిక 2

    అనువాద సైకియాట్రీ వెబ్‌సైట్ (//www.nature.com/tp) లోని కాగితంతో అనుబంధ సమాచారం